158342. lajstromszámú szabadalom • Eljárás trienin antibiotikum előállítására

158342 6 Mikróbaellenes tulajdonságok In vitro a trienin mikroorganizmusok ellen a következő hatást fejti ki: 1. táblázat Mikroorganizmus Közepes gátló koncentráció (meg/ml) S. aureus 0,37 S. pyogenes 0,44 E. coli >50 P. vulgaris >50 P. aeruginosa >50 S. schottmuelleri >50 Geotrichum candidum 9,4 S. cerevisiae 7,8 C. tropicalis 6,3 C. krusei 9,4 C. albicans 8,6 (14,0) T. mentagrophytes 50 F. bulbigenum 6,3 A. niger 6,3 Eszerint a trienin hatásos,^ mint baktérium elleni és gomba elleni szer a fent felsorolt mikroorganizmusok ellen. Mint ilyen felhasználható tartósítószerként is, például bőrben, papírban és festékekben és főképp műanyagokban és textíliákban, penész és más gombák elleni megvédésükre. Textiliák védelme esetében például az anyagot itatással vagy beszór ássál impregnáljuk trieninnel vagy egy sójával. A trienin alkalmas növényvédőszerként is erre a célra a kezelni kívánt növényekre permetezve. Alkalmas permet előállítására a trienint vagy egy sóját vízzel és előnyösen nedvesítőszerrel, például polioxialkilénszorbitán zsírsavas sójával (pl. Tween 20, polioxietilénszorbitán-monolaurát) golyósmalomban őr A trienin felhasználható felületi fertőtlenítőszerként is. Erre a célra előnyösen egy detergenst vagy más tisztítószert is tartalmazó 0,1— 10,0, előnyösen 0,5—1,0 s%-os oldatban alkalmazzuk. Az ilyen oldatok felhasználhatók padlózat, falak, asztalok stb. fertőtlenítésére, továbbá tejüzemekben és élelmiszerüzemekben tisztításra. A következő példa szemlélteti a trienin előállítását és elkülönítését. Példa: A Streptomyces sp. ATCC 21229 mikroorganizmust elkülönítettünk a hagyományos lemezes módszerrel egy Piscatawayben (New Jersey) vett talajmintából. Ferde agar táptalajra vittük, amely a következőképpen készült: 20 g paradicsompép, 20 g zabliszt és 500 ml forró víz híg pépes keverékét hűtöttük, leszűrtük, majd hoz-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 záadtunk 500 ml vízzel és 15 g agárral készült oldatot, és 121°-on 1 att gőznyomás alatt 20 percig sterilizáltuk. Ezen a táptalajon a légmicélium szürke, és világosbarna oldható pigment képződik. Az erősen spórás ferde tenyészet egy részét 0,01% Dupanolt tartalmazó oldatban szuszpendáltunk, és ezzel oltottunk be 50 ml steril táptalajt egy 250 ml-es lombikban. A táptalaj összetétele a következő volt: szójababliszt glukóz • kalciumkarbonát dikáliumhidrogénfoszfát káliumdihidrogénfoszfát ammóniumszulfát kukoricalekvár desztillált vízzel kiegészítve 1,5 5,5 0,7 0,1 0,1 0,5 g 0,25 g 1000 ml-re g A sterilizálást 121 C°-on és 15 att gőznyomás alatt 30 percig végeztük. Forgó rázógépen 25 C°-on végzett 48 órai inkubálás után átvittük a lombik tartalmát egy 4000 ml-es lombikban levő 1000 ml steril közegbe. Forgó rázógépen 25 C°-on végzett 48 órai inkubálás után a lombik teljes tartalmával inkubáltunk egy 800 literes fermentorban 225 liter fenti összetételű táptalajt, amely 0,01% habtalanítószert tartalmazott. A tenyésztést 48 óra hosszat 25 C°-on folytattuk, percenként 30 cm felületi levegő sebességgel, és 0,2 LE/400 liternek megfelelő keveréssel. Ezután a fermentor tartalmából k'b. 55 literrel beoltottunk 500 liter ugyanolyan táptalajt egy 1000 literes fermentorban. A fermentációt 120 óra hosszat 25 C°-on, 30 cm/perc felületi levegősebességgel és 0,2 LE/400 liternek megfelelő keveréssel végeztük. 120 órai fermentáció után a teljes fermentlevet Hyflo szűrést elősegítő anyaggal együtt szűrőprésen megszűntük. Minthogy az antibiotikum zöme a szűrőlepényben van, a szűredéket kiöntöttük. A szűrőlepényt 2 ízben extraháltuk 1 kg szűrőlepényre 2 liter izopröpilalkohollal, és az egyesített kivonatot vákuumban térfogata 1/(60—1/70 részére koncentráltuk. A kapott koncentrált vizes szuszpenzióhoz háromszoros térfogatú izopropilalkoholt adtunk, és a szuszpenziót 4—6 óra hosszat 5, C°-on tartottuk. A keletkezett csapadékot kiszűrtük, és 30 C°-on vákuumban megszárítottuk. Ebből a csapadékból 10 g-ot butilalkohol és víz híg sósavval 2,5-re beállított pH-jú elegye 1 liter felső és 1 liter alsó fázisában szuszpendáltunk. 30 perces keverés után mindkét fázist megszűrtük, és a szűredéket választótölcsérbe öntöttük. Az alsó fázist eltávolítottuk, és a felső fázist a fentebb megadott oldószerrendszer 1 liter alsó fázisával ráztuk. Az alsó fázist ismét eltávolítottuk, és ezt az extrakciós műveletet még 3 ízben megismételtük. A pH-t 2,5 értéken tartottuk az egész eljárás során. Az utolsó alsó fázis eltávolítása után a felső fázist híg nátron-3