158238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkalikus proteáz előállítására
5 158238 6 A kapott enzimfehérje proteolitikus aktivitása nátriumperfoorátban valamint mosószerkomponensek jelenlétében az íl. és 2. Táblázatokban bemutatott értékek szerint változott. 2. példa: Bacillus subtilis varietas proteolyticus törzs sejtjeit az alábbi összetételű 'táptalajban .tenyésztettük : 6000 ml össztérfogat: kukoricaliszt 120 g szój&Liszt. 80 g CaCl2 sicc. 6 g napraforgóolaj 6 g A tenyészlevet a tenyésztés teljes időtartama alatt 1 : 1 volumen levegő/táptalaj térfogat mértékben levegőztettük és szellőztettük.' A tenyészlé hőmérsékletét a tenyésztés során konstans értéken, 28 C°-on tartottuk. A pH a tenyésztés teljes időtartama alatt 6,3—6,9 érteik •között változott. 90 órás tenyésztés után a tenyészlé 'extracelluláris proteolitikus enzimaktivitása 10 ,mAE/ml volt. Ekkor a tenyészlé levegőztetését megszüntettük, a tenyészlevet -\-16 C° értékre hűtöttük le, majd 21,4 g Na2 HPO/.-t és 33,3 g CaiCl2-t adagoltunk a sejtes folyadékba, erőteljes kevertetés mellett, 30 perc után a p'H-t 10%-os iNaOH-val 9,0-ra állítottuk 'és 1 áras kevertetés után a tenyészlevet vák'Uumnuccson szobahőfokon, pH 8,0-n sejtmentesre szűrtük. Az éles szűrtlé térfogata: 5400 ml, proteolitikus enzmi aktivitása: 11,10 mAE/ /mi. A tenyészlevet +4 C°-ra hűtöttük le és 3240 g amtmóniumszulíátot az oldat állandó, erőteljes keventetése mellett az oldatba adagoltunk. Az oldat pH-^ja spontán változott. 18 órán át -f-4 C°-on való állás után a képződött csapadékot vákuumnuccson kiszűrtük az aktuális légnyomáson és hőimérsékleten. A kapott csapadék nedves súlya 36 g volt. A nedves enzimfehérjét 40 C°-on levegőátfúvatással megszárítottuk. A szája zitier mék súlya 25,6 g 1,88 AE/g aktivitással. A kitermelés £3,2% volt, az eredeti tenyészlé aktivitására vonatkoztatva. A kapott enzimfehórje proteolitikus tulajdonságait ihemoglotbinra gyakorolt oldó hatásán keresztül vizsgáltuk. Az enzimfehérje piroteolitikus aktivitásának optimuma pH 9,0 értéken és 50 C°-on volt. Az aktivitás pH-tól való függésének szélső értékei 6,0—10,0 értékig terjeditek. pH 7,0 értéken 30 percen át 50 C°on tartva enzimaktivitás-veszteség nem volt tapasztalható. pH 10,0 éritéken 50 C°-on 30 percein, át tartva a proteolitikus enzimaktivitás 30%-os veszteségét szenvedett. A kapott enzimfehérje proteolitikus aktivitása nátriumperborátban, valamint mosószerkomponensek jelenlétében az 1. 'és 2. Táblázatokban bemutatott értékek szerint változott. 3. példa: A Bacillus subtilis varietas proteolyticus törzset az alábbi összetételű táptalajban tenyész-5 tettük: 6000 ml össztérf ogat: kukoricaliszt 120 g szójaliszt 60 g 10 CaCl2 sicc. 6 g pálmaolaj 6 g A tenyészlevet a tenyésztés teljes időtartaima •alatt 1 : 1 volumen levegő/táptalajtérf'ogat mér-15 tékben levegőztettük és szellőztettük. A tenyészlé hőmérsékletét a tenyésztés során konstans értéken, 33 C°-on tartottuk. A pH a tenyésztés teljes időtartama alatt 6,6—7,1 értékek között változott. 65 órás tenyésztés után a 20 tenyészlé extracelluláris proteolitikus enzimaktivitása 15 mAE/ml volt. Ekkor a tenyészlé levegőztetését megszüntettük, a tenyészlevet +16 C° értékre hűtöttük le, majd 21,4 g Na2 HPO/ r t és 33,3 g CaClj-t adagoltunk a sejtes foiyadék-25 ba, erőteljes kevertetés mellett. 30 perc után a pH-t 10%-os NaOH-val 9,0-ra állítattuk és 1 órás íkevertetés után a tenyészlevet vákuumnuccson szebahőíokon pH 9,0-án sejtmentesre szűrtük. Az éles szűrtlé térfogata: 5600 ml, 50 proteolitikus aktivitása: 16,10 xnAE/iml volt. A tenyészlevet +4 C°-ra hűtöttük le és 3360 g ammóniumszulfiátot, az oldat állandó, erőteljes keverfetése mellett az oldatba adagoltunk. Az oldat pH-ja spontán változott. 18 órán át -j-4 S5 C°-on való állás után a képződött csapadékot vákuumnuccson kiszűrtük az aktuális légnyomáson és hőimérsékleten. A kapott csapadék nedves súlya: 43,0 g volt. A nedves enziimfehérjét 40 C°-on levegőátfúvatással raegsziárítoít-40 tuk. A száraz termék súlya: 30,6 g, 2,;5 AE/g aktivitással. A kitermelés 85,0 %-os, az eredeti tenyészlé aktivitására vonatkoztatva. A kapott enziimfehér j e proteolitikus tulaj-45 donságait ihamogfobinra gyakorolt oldó hatásán keresztül vizsgáltuk. Az enzimfehérje proteolitikus aktivitásának optimuma pH 9,0 értéken és 50 C°-on volt. Az aktivitás pH-tól való függésének szélső értékei 6,0—10,0 értékig 50 terjedtek. pH 7,0 értéken 30 percem keresztül 50 C°-on tartva enziniaktivitás^veszteség nem volt tapasztalható. pH 10,0 értéken 50 C°-on 30 percen át tartva a proteolitikus enzimaktivitás 25%-os veszteséget szervedéit. 55 A kapott enzimfehérje proteolitikus aktivitása natriumperboratban, valamint mosószerkomponensek jelenlétében .az 1. és 2. Táblázatokban bemutatott értékek szerint változott, 60 4. példa: A Bacillus subtilis varietas proteolyticus törzs sejtjeit az alábbi összetételű táptalajban 65 tenyésztettük: 3
