158175. lajstromszámú szabadalom • Eljárás daunorubicin atibiotikum előállítására
7 158175 lése céljából való tenyésztésének általános körülményei elég nagy mértékben változhatnak, iés a mindenkori szükséglethez alkalmazhatók. A daunorubicin a fermentlléfoől különféle módszereik szerint különíthető el. Megszűrhető a fenmentlé 1,5 és ! 9 pH között, és ily imódon az aktivitás zöme , a szűredékbe kerül. A szűrőlepényt vízzel kimosva az gyakorlatilag aktivitásmentessé váiük. Ezt a műve-'letet előnyös szavas közegben végrehajtani, nevezetesen oxálsawál 1,5—2,0 pH^ra megsavanyított közegben. A szűrést 2 és 7 pH között, előnyösen 2 pH körül 1—3 szénatomos álfás alkohol jelenlétében is végrehajthatjuk. A fent említett extriakciós műveléteikben a diaunoirubicint vizes vagy vizes^aJkoholbs oldatban kapjuk, majd vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, például butanollal, meibilizobutiilkeitonnal, étiláoatáttal vagy Moroformimail extrahálva 5,5 és 9 pH között, előnyösen 7,5 pH körül a daunorubicint átvisszük szerves oldatba. Ez!t az extirialkiciót esetleg megelőzi egy ionkicserélő gyantával való kezelés; ebben az esetben a vizes oldat pH-ját fcb. 4 érteikre állítjuk he, majd . a daunorübicinit 'kationkieserélő gyantán lekötjük. Ezután a daunorubicint előnyösen 10% vizét és 1% ná'triumkloridot tartalmazó metanollal eluáljuk. Az eluátumot az alkohol eltávolítására koncentrál juk, majd a koncentrátumoit a fent leint módon exitraháljuk. Ügy is eljárhatunk, hogy a fermentlevet 5,5 és 9 pH között, előnyösen 7,5 pH körül vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, például butanollal, etilaioétáttal vagy kloroformmal, extraháljulk. Ebben az esetben a teljes aktivitás a szerves fázisba jut, amelyet a vizes fázistól a szokásos módon választunk el. Bármilyen módon is hajtjuk végre .. az extrakciőt, a daunorubicint végül- szerves oldat alakjában kapjuk meg. . Ekkor előnyös lehet tisztítást végrehajtani az antibiotikumnak rendre vizes oldatba, majd szerves oldatba való átvitelével a pH módosítása közben. Utána a nyers antibiotikum elkülöníthető a szerves oldatából bepárlással vagy rossz oldószerével, például hexánnal való ikicsiapáissal. Tisztább daunorubicin előállítására a .használatos hagyományos módszerek alkalmasak, például kromatografálás különféle adszorbenseken, ellenáram megosztás vagy különféle oldószerek közti imiegoszitás. A daunoirubicin átailakíthiató savakkal alkotott addíciós sóivá, például hidrokloridjává. Ezek a sók hagyományos módszerekkel 'tisztíthatók. Az új eljárással kapott daunorubicinnek és sóinak tulajdonságai azonosak a 13 057 R. P. antibiotikumnak és sóinak az 1 533 151 számú francia szabadalom leírásában közölt tulaj doriságaiival. A köveitkező példák szemléltetik a találmány szerinti 'eljárás gyakorlati végrehajtását anélkül, hogy annak oltalmi körét ezekre kívánnánk korlátozni. 1. példa: A pH-t 120 ml 10 n niátronlúggal beállítjulk 7,2-re. A táptalajt 122 CD-os gőznek 40 percig való átbuborékoltatásával sterilizáljuk. Lehűlés 15 után a tiáptallaj térfogata 120 liter, ás pH-ja 6,65. Ekkor beoltjuk Streptamyees bifurcus PS 23 210 törzsnek 200 ml rázott Erlenmeyer-lombikos tenyészetével. A tenyészetet keverés és steril levegővel való levegőztetés közben 2Í7 2C e°-on 30 óra .hosszat inkubáljuk. Ekkor alkalmas a termelő tenyészet ibeoltására. A termelő tenyésztést a következő anyagokkal megtöltött 8000 literes fermentorban végezzük: i5 szeszmoslék 4 kg szemesbab 12 kg szójabábolaj 8 liter nátriumklorid 2 kg kobaltklorid-bexanitrét 8 kg 30 csapvízzel kiegészítve 330 literre. - 2. példa: Az 1. példában leírt .fermentáció során ka-55 pott 200 liter fermentlevet betoltunk egy keverővel és fűtő ikígyőcsőveil ellátott tartályba. Hozzáadunk 6 kg oxálsavat, és 50 C°-ra melegítjük. A keverést és a hőmérsékletet 1 1/2 óra hosszat változatlanul tartjuk. Ezután a 60 szuszpenziót szűrősajtón megszűrjük, 30 kg szűrést elősegítő anyag hozzáadása után. A szűrőlepényt a szűrőn 100 liter vízzel kimossuk. A 260 liter térfogatú szűredéket 15 C°-ra hűtjük, és a pH-ját 10.%-os nátronlúg hozzáadásával 65 4,5 értékre állítjuk be. Egy 170 literes fermentorba betöltjük a következő anyagokat: 5 pepton 1200 g húskivonat 600 g cerelöz 1200 g agar 240 g 10 csapvízzel kiegészítve 110 literre. A pH-nak 400 mü. |10 n nátronlúggal 7,70 értékre való beállítása • után a táptalajt. 122 C°-os gőzzel 40 percig sterilizálj uk. Lehűlés után a 35 táptalaj térfogata 360 liter. Ezt kiegészítjük 40 liter 6 kg cerelózt tartalmazó steril vizes oldat hozzáadásával 400 literre. így pH-ja 6,80-Most a táptalajt beoltjuk a 170 literes fermentorban a fent leírt módon készült 40 liter 40 oltóanyaggal. 170 óra hosszat 27 C°-on fermentálunk, a táptalajt percenként 260 fordulatú turbiniaikeverővel keverve és aránként 30 m3 steril levegővel levegőztetve. Ekkor a tenyészet pH-jja 7,30 ós a fermentlé térfogata 45 305 liter. A jelenlevő daunorubicin (13 057 R. P.) -mennyisége 22,5 fig/ml. Azonkívül a fermentlé a daunorubicin aglukonját tartalmazza, továbbá a 13 213 R. P. összetevőt. Ez utóbbi a megsavanyított fermenitlének 50 C^ra való 50 melegítésére daunDrubucinná hidrolizálódik.
