158163. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezocisztreptamin származékok és savas addiciós sóik előállítására

158163 Párhuzamosan végzett in vitro kísérletekben 50 klinikailag frissen izolált Pseudomonas aeruginosa ellen az ambutirozinszulfát kb. ötször hatásosabbnak bizonyult, mint a carbenicillin-nátrium, egy félszintetikus penicillinféleség, mely ezzel a baktériumfajtával fertőzött betegek kezelésére használatos. A minimális gátló koncentrációk a következők: ambutirozin esetében (szabad bázisra számítva) 2,20—33,5 mikrogr/ml; énnek mértani középarányosa 8,89 mikrogr/ ml. Carbenicillin esetében (szabad savra számítva) 4,89—310 mikrogr/ml; ennek mértani középárányosa 46,4 mikrogr/ml. Az ambutirozin-szulfát baktériumellenes hatásosságát akut fertőzésekkel szemben kísérletileg egereken is kimutattuk. Megközelítőleg 2— 10 eng bázis/testsúly kg egyszeri szubkután adagolása hatásosnak bizonyult Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/Proteus vulgaris és Staphylococcus aureus által okozott fertőzések ellen. Az ambutirözinnak egyszeri átlagos adagja szulfát formájában, amely egy csoport egér felére nézve halálos (akut LD50), 3050 mg bázis/ testsúly kg szubkután alkalmazás esetén, 2188 mg/kg intnaperitoneáliisan és 487 mg/kg intravénás alkalmazásnál. Az ambutirozint és savas addíciós sóit a találmány értelmében úgy állíthatjuk elő, hogy a Bacillus circulans nevű mikroorganizmus ambutirozint termelő törzsét mesterséges körülmények között tenyésztjük. A „Bacillus circulans ambutirozint termelő törzse" kifejezés a jelen leírásban a Bacillus circulans-nak egy törzsét jelenti, amely a leírt mesterséges körülmények között tenyésztve olyan fermentlevet eredményez, amelyből az aimbutirozin vagy annak valamilyen savas addiciós sója az alábbiakban következő eljárásokkal kinyerhető. Bacillus circulans NRRL B—3313 megjelölés a Bacillus - circulans egy törzsére vonatkozik, amelynek jellemzőit az alábbiakban megadjuk és az nincs korlátozva a mikroorganizmusnak 5 arra a speciális tenyészetére, amely a különleges tenyészet-gyűjteményben található. Az NRRL B—3:313 pontos azonosítását a „Ber-10 gey's Manual of Determinative Bacteriology" 7. kiadása (1957) segítségével végeztük. A mikroorganizmus azonosításánál használt- táptalajokat és módszereket a következő közlemények írják le: Smith, Gordon és Clark, Aerobic Sporeforming 15 Bacteria, Agricultural Monograph. 16, U.S. Department of Agriculture (1952) valamint Society of American Bacteriologists, Manual of Microbiological Methods (1957). 20 A mikroorganizmus aerób, Gram-szerint változóan festődő mozgékony pálca (0,3—0,9X1,1— 4,7 mikron), amely húskivonaton, vagy más, komplex szerves táptalajon növekszik és endos-25 pórákat képez, tehát a Bacillus genus-hoz tartozik. Spóratokjai határozottan duzzadtak: Spórái ellipszoidálisak, ritkán hengerek, helyzetük centrális-terminális, a spórák fala vastag és könnyen festhető. Gram-szerint változóan fest,Q hető. A Bacillus nemzetség (genus) fajtáira (species) vonatkozó kulcs szerint (Bergey's Manual, 613—615 old.) a mikroorganizmus a II. jelű fajták közé tartozik (615. oldal). A mikroorganizmus szénhidrátokból nem termel gázt, szaprofita, a 35 szokásos táptalajokon növekszik, a keményítőt hidrolizálja, nem termel indolt vagy acetilrnetilkarbinolt és nem növekszik 65 C°-on, ennélfogva a B., 1., a., bb., cc. helyre tartozik. Csakis egyetlen fajta, a B. circulans foglal helyet a kulcs 40 ezen mezőjében. A következő 2. Táblázatban közölt kísérletek szerint a mikroorganizmus nem tér el szignifikánsan a B. circulanstól, (Jordan 1890, emend, by Ford, 1916) ahogy az a Bergey's Manual 628. és 629. oldalán le van írva. Ezt a mikroorganizmust tehát a B. circulans fajta (spe-45 A Bacillus circulans-nak a találmány céljainak megfelelő egyik törzsét talajmintából kaptuk, amelyet Melspruit (East Transvaal, Dél-Af- . rika) közelében gyűjtöttek. Ennek a törzsnek a szubkultúrái (másodlagos tenyészetei) letétbe vannak helyezve az alábbi intézménynél; United States Department of Agriculture, Northern Utilization Research and Development Division, Peoria (Illionis állam), és ott az állandó törzsgyűjteményben NRRL B—3312 és NRRL B—3313 azonosítási számmal vannak nyilvántartva. Az NRRL B3312 szám az eredeti letétnek, míg az NRRL B—<3313 szám egyetlen telepből eredő kiválasztásnak felel meg. A két letétbe helyezett szubkultúra morfológiai és fiziológiai jellemzőit tekintve lényegében véve azonos. A jelen leírásban a Bacillus circulans NRRL B—3312 és a 65 55 60 cies) egy bizonyos törzsének (strain) tartjuk. összehasonlító kísérletekben a B. circulans NRRL B—3313 néhány vonatkozásban különbözik az ATCC (American Type Culture Collection) 4513 jelű törzstől (javasolt új típus, lásd N. R. Smith et al., „Type cultures and proposed neotype cultures of some species in the genus Bacillus", J. Gen. Microbiol. 34: 269—,272, 1964). A különbségek a vegetatív sejtek és a spórák nagyságában, a spórák falának vastagságában, a 45 C°-on észléit növekedésben, az agar-táptalajon mutatkozó növekedési jellemzőkben, a zselatin és a kazein hidrolizálásában, a citráthasznosításban, a metilénkék reoxidációban, valamint az L-arabinóz, az inulin, a láktóz és a D-xilóz fermentációjában mutatkoznak. Az NRRL B—.3313 jellemzői az ATCC 4513-mal összehasonlítva a 2. Táblázat foglalja össze: 3