158035. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fajspecifikus gömőkor diagnosztikum előállítására
158035 3 4 szaccharid-természetű anyagot tartalmaz. Ezek közül egyes közös poldszacehairid-frakcióinak tulajdoníthatók azok az ún. parallergíás reakciók, amelyek folytán nem csak a homológ, de más Mycobacterium-fajokkal fertőzött állatok is pozitív reakciót adnak, pl. a M. bovisból készült tuberkulin befecskendezésére, amely mindezeket az anyagokat tartalmazza. Ha viszont a különféle Mycobacterium-fajok tenyészeteiből ill. azok kivonatából a jelenlevő többféle fehérjie-poliszaccharid komplexet elkülönítjük egymástól és az így nyert frakciókban a fehérjét elválasztjuk és eltávolítjuk a poliszaccharid mellől, akkor — amint ez irányú kutatómunkánk során felismertük — találunk egy olyan lényegileg egységes poliszaccharid frakciót, amely specifikusan csak a homológ Mycobacterium-fajjal fertőzött egyedeken ad pozitív reakciót. Az egyes Mycobacterium-tenyészetekből kinyert fehérjepoliszaccharid komplexek frakcionálás útján történő szétválasztására azért van szükség, mert az egyes fajok tiszta tenyészetéből kinyerhető antigén anyag sern egységes, hanem többféle fehérjét tartalmaz és ezek mindegyikéhez másfajta poliszaccharid kapcsolódhat, e poliszaccharidok közül általában azonban csak az egyik ad biztosan fajspecifikus reakciót. Az, hogy melyik jelenlevő fehérjéhez van a keresett fajspecifikus poliszaccharid kötve, ugyancsak jellemző az egyes Mycobacterium-fajokra, tehát ennek egyszeri megállapítása után már minden esetben ugyanazt a jellemző tulajdonságokat mutató és e jellemző tulajdonságok alapján elkülöníthető frakciót kell csupán kinyerni a kívánt fajspecifikus antigén előállítása céljából. E felismerésünk merőben új, 'minthogy eddig még az sem volt ismeretes, hogy a mycobacteriumok fehérjementes poliszaccharid-'antigénjei egyáltalán alkalmasak diagnosztikai reakciók lefolytatására, még kevésbé lehetett tehát ismeretes . az, hogy az allergen anyag firafectonálása és valamely frakcióból nyert fehérje-poliszaccharid komplex fehérje-részének eltávolítása útján olyan poliszaccharid-készítrnényhez juthatunk, amely specifikusan alkalmas a különféle Mycobacterium-fajokkal való fertőzöttség egyértelmű felismerésére. . A faj specifikus tuberkulo-poliszaccharid elkülönítésén alapuló találmányunk értelmében tehát a különféle Mycobacteriumfajokkal való fertőzöttség megállapítására alkalmas faj specifikus diagnosztikai készítmény előállítása oly módon történik, hogy a megfelelő Mycobacteriumtörzs tenyészetéből a szokásos módon készített kivonatból zsíroldószerrel eltávolítjuk a zavaró lipoidokat, majd megfelelő frakcionálási eljárással szétválasztjuk a jelenlevő különböző fehér je-poliszaccharid komplexeket és ezek közül abból, amelynek poliszacoharid-része a kívánt fajspecifikus reakciót adja, a fehérje-poliszaccharid kötés megbontása után.app.liszaccha, ;rid-részt elkülönítjük. Az egyes Mycobacterium-tenyészetekben jelenlevő különböző fehérje-poliszaccharid komp-5 lexek szétválasztása célszerűen a fehérjék izoelektromos pontjának különbözősége alapján, elektroforézissél vagy az egyes frakcióknak az izoelektromos pontján történő frakcionált kicsapasával folytatható le. Az egyes Mycobacterium-10 fajok tiszta tenyészete minden esetben ugyanazokat a jellemző fehérje-poliszaccharid frakciókat tartalmazza és így minden Mycobacteriumfaj esetében egyszer s mindenkorra megállapítható, hogy mi az elektroforézissél szétválasztha-15 tó frakciók izoelektromos pontja és melyik az a frakció, amely a kívánt fajspecifikus tubeíkulopoliszaccharidot tartalmazza. ; , .-, így a Mycobacterium bovis tenyészetekből 20 nyert kivonat fehérjefrakcióit a következő értékek jellemzik: a frakció jele izoelektromos pontja 25 A 6,8 > B 9,6 C' 3,8 D 9,3 t0 A Mycobacterium avium tenyészetek fehérjefrakcióinak izoelektromos pontja: a 6,6 b 9,0 35 C 4,2 Vizsgálataink szerint e frakciók közül a M. bovis esetében a ,,B" frakció, a M. avium esetében pedig a ,,b" frakció tartalmazza a fajspeci-40 fikus tuberkulin- (és szerológiai) reakciót adó poliszaccharidot és így ezt a frakciót kell a fajspecifikus diagnosztikai készítmény előállítása céljából elektroforézissél vagy az izoelektromos pontokon történő frakcionált kicsapással elkülö-4R níteni és abból a fehérje-rész eltávolítása után a tiszta poliszaccharid-részt kinyerni. Hasonló módon, a tenyészet lipoidoktól mentesített kivonatának elektroforézissél való frakcionálása és az egyes frakciókból elkülönített CQ poliszaccharid-rész vizsgálata útján bármely más Mycobacterium-faj esetében is meghatározható a faj specifikus reakciót adó poliszaccharid, amelyet azután a fent megadott módon különíthetünk el a fajspecifikus diagnosztikai reagens 55 előállítása céljából. A találmány szerinti eljárással, a fent leírt módon a különféle Mycobacterium-fajok, pl. M. bovis vagy M. avium tenyészeteiből nyert poliszaccharid-frakciók immunkémiailag egységesek 60 és sem szerológiai, sem. allergiás próbákban nem adnaik kereszitreakcioit. A kívánt frakció elkülönítése és >a fehérje-rész eltávolítása után vizes oldatban íkapoítt pioliszaecharid elkülönítése önmagában ismert módszereikkel, pl. az oldat gélfiltráláis 65 oldat pH-értékét 7,2-re állítjuk. 10 15 20 ?
