158024. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 17 967 RP antibiotikum előállítására
158024 11 12 A keverék pH-ját 450 ml 10 n nátronlúggal 6,85-re állítjuk be. A közeget ezután 122 C°-os gőznek 40 percig tartó átbuborékoltatásával sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalaj térfogata 250 liter és a pH-ja 6,85. Ékkor beoltjuk Streptomyces roseopullatus, DS 20 073 törzs 200 ml rázott Erlanmeyer-tenyészetével. Ezután 27 C°-on 27 ói a hosszat keverés és steril levegővel való levegőztetés közben fermentálunk. Ekkor >& tenyészet alkalmas a termelő tenyészet beoltására. A termelő tenyésztést a következő anyagokkal töltött 800 literes fermentorban végezzük: szeszmoslék kúkoricalekvár (50% száraz éxtrakt tartalommal) szójaolaj ' kobaltklorid-hexahidrát csapvízzel kiegészítve 7,5 kg 10 10 10 450 kg liter g literre. 20 A keverék pH-ját 1800 ml 10 n nátronlúggal beállítjuk 7,25-re, majd hozzáadunk 2,5 kg kalciumkarbonátot. Ezután a táptalajt 122 C°-os gőznek 40 percig való átbuborékoltatásával sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalaj térfogata 490 liter. Ezt kiegészítjük 500 literre 5 liter steril vizes, 2,5 kg cerelózt tartalmazó oldat és 5 liter steril vizes, 1 kg ammóniumszulfátot tartalmazó oldat hozzáadásával. A táptalaj pH-ja ekkor 7,10. Ezután beoltjuk a 350 literes fermentorban a fent leírt módon készült 40 liter oltóanyaggal. A tenyésztést 27 Cq -on végezzük 138 óra hosszat, percenként 175 fordulatú keverővel keverve és óránként 20 m3 steril levegővel levegőztetve. A közeg pH-ja ekkor 7,40, és a fermentlé térfogata 450 liter. A jelenlevő antibiotikum mennyisége 27 ///ml. '• 2. példa Az 1. példában leírt módon kapott és 27 .«/ml titerű 450 liter fermentlevet keverővel ellátott tartályba öntünk. A fermentlé pH-ját 200 ml 5 n sósavval 7 értékre állítjuk be. Ezután hozzáadunk 400 liter etilacetátot, és 1 óra hosszat keverjük. Utána hozzáadunk 50 kg szűrést elősegítő anyagot, és a szuszpenziót szűrőprésen megszűrjük. A szűrőlepényt 100 liter etilacetáttal, majd 100 liter, vízzel mossuk. Az egyesített szüredéket és mosóvizet dekantáljuk. A felső szerves fázis térfogata 390 liter. A 610 liter térfogatú alsó vizes fázist kiontjuk. A szerves kivonatot keverővel ellátott tartályban 40 liter vízzel mossuk, és a'mosott kivonatot elkülönítjük a vizes részekből. A mosott szerves kivonatot 70 torr nyomás alatt 27 C°-on 3. literre koncentráljuk. A koncentrátümot 30 liter hexánnal hígítjuk. Az antibiotikum 'kicsapódik; szűréssel elkülönítjük, hexánnal mossuk, és 5 torr nyomás alatt szárítószekrényben 40 C°-on megszárítjuk. . így 31 g nyers 17 967 RP antibiotikumot kapunk 244 /.t/mg titerrel. 3.. példa A 2. példában leírt módon kapott 47 g anyagot keverés közben feloldunk 1 liter dimetilfor-10 mamidban. A kapott oldatot szűréssel derítjük, ; majd 4 óra alatt keverés közben hozzáadunk 1,5 liter 50:50 térfogatarányú metanol-víz elegyet a 17 967 RP kristályosodásának megindítására. A kristályokat szűrőre visszük, 0,3 liter 50:50 15 térfogatarányú metanol-víz eleggyel és 0,2 liter acetonnal mossuk. Ezután a kristályokat 15 óra hosszat 50 C°-on 5 torr nyomás alatt szárítjuk, így 8,7 g kristályos terméket kapunk 600 ///mg titerrel. 4. példa A 3. példában leírt módon kapott 8,4 g termé-25 ket keverés közben feloldunk 250 ml dimetilformamidban. A kapott oldatot 120 g, 50:50 térfoga tarányú dimetilf ormatnid-aceton eleggyel átitatott Merck-féle kovasavgélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. A kovasavgélt 500 ml 30 50:50 térfogatarányú dimetilf ormamid-aceton eleggyel mossuk. A kb. 500 ml térfogatú, a 17 967 RP antibiotikumot tartalmazó sárgára színezett frakcióhoz hozzáadunk 500 ml 50:50 térfogatarányú metanol-víz elegyet, mire a 35 .17 967 RP kikristályosodik. A kristályokat szűrőre visszük, 150 ml 50:50 térfogatarányú metanol-víz eleggyel, majd 100 ml acetonnal mossuk. A terméket 15 óra hosszat 50 C°-on 5 torr nyomás alatt megszárítjuk. 5,74 g 17 967 RP anti-40 biotikumot kapunk 880 ju/mg titerrel. 5. példa 45 A4, példában leírt módon kapott 21,7 g terméket keverés közben feloldunk 600 ml dimetilformamidban. Az oldatot szűréssel derítjük. Ezután 4 óra alatt lassú keverés közben hozzáadunk 1200 ml 50:50 térfogatarányú aceton-víz 50 elegyet a. 17 967 RP antibiotikum kristályosodásának kiváltására. A kapott kristályokát szűrőre visszük, 200 ml 50:50 térfogatarányú aceton-víz eleggyel, majd 200 ml acetonnal mossuk, 15 óra hosszat 50 C°-on 5 torr nyomás alatt, majd 8 óra 55 hosszat 50 C°-on 0,5 törr nyomás alatt szárítjuk, így 18,2 g 17 967 RP antibiotikumot kapunk 1Ó00 íí/mg titerrel. 60 <5. példa A 2. példában leírt módon kapott 195 ///mg titerű 20 g terméket feloldunk aeeton-dioxán-víz 10:3:1. térfogatarányú elegyében. A kapott olda-65 tot 6,5 g oldhatatlan anyag kiküszöbölésére meg-6
