157985. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oleficin és sói előállítására mikrobiológiai úton
157985 8 Szójaliszt Kukoricalekvár 3,0% 0,2°/o (50% szárazanyagtartalom) kazein) Kazein-hidrolizátum 1,0% (10% NaCl 0,3% CaCCb 0,5% Glükóz 3,5% Víz 91,5% pH isterilezés előtt 7,0—7,2. Az inokulum-tenyészettel — 28 C°-0!n, 48 órán át sífcrázógépen történő rázatás után —• 100 1 hasznos térfogatú üzemi fermentort oltottunk be. A fermewtor táptalajániak összetétele: Szójalisizt Kuköricaievkár' 2,0% 0,2% (50% szárazanyagtartalom) Kazein-hidrolizátum 1,0% (10% kazein) NaCl 0,3% CaCOs 0,5% Glükóz 3,0% Pálmaolaj 0,2%) Víz 92,8% pH 6,8—7,0 stérilezés előtt. A sterilezést 30 percen át 120—122 C°-on célszerű végezni. Fermentációs paraméterek: hőmérséklet: .26— 29 C°, optimálisan 28 C°; a keverő fordulatszáma: 260/perc; az átáramoltatott levegő térfogata: 100 l/perc. A mikroszkópi 'képben a 48. órában a micéliumok erős fragmentálódása figyelhető meg. Az antibiotikum koncentráció ekkor 140—180 y/ml. A fermentáció a 65—68. órában befejeződik. 60—70% fragmenitáció tapasztalható és 330— 360 y/ml az olieficin-koncentráció, amely érték további tenyésztés esetén esik. A meghatározás biológiai értékméréssel Bacillus subtilis-szel szemben történt (pH=6,5) a szokásos módon [Horváth I., Wix Gy.: Acta Physiol. Hung. 4, 435 (1953)]. 2. példa . A tenyésztés 28 C°-on, 500 l/perc átáramoltatott levegőmennyiség és 260 percenkénti fordulatszám mellett történt. A mikroszkópi kép 1. példában leírt változása mellett a 65—70. órában 340—370 y/ml ofeficin-koncentrációt értünk el. 10 2. példa A 2. példa szerinti módon készült 100 1 fermentUé pH-ját 2 n sósavval 4,0-re állítottuk, majd szűrtük. A biológiailag inaktív szűrletet elöntöttük. A micéliumot 2X15 1 metanollal 30— 30 percen át extraháltuk. A szűrt extraktumokról a metanolt vákuumban 50 C°-ig, előnyösen 40 C°-on ledesztilláltuk. A visszamaradó vizes szuszpenziót 2X5 liter etiliacetátital extraháltuk, majd az egyesített extraktumökat nátrium-szulfáton megszárítottuk, szűrtük és szárazra pároltuk. A nyers antibiotikumot pétroleterrél eldörzsöltük, szűrtük és 20 C°-on megszárítottuk. Ily módon 15,80 g sötétvörös-fekete színű nyerstermékhez jutottunk, mely 800 y/mg aktivitású. 15 20 25 30 35 40 45 8,00 g nyers oleficint n-propanol-etilacetát-0,25 n NH4 OH=6 : 1 : 4 oldószer-elegyben 320 g 5 pH-jú inaktiváit alumíniumoxid oszlopon kromatografállunk. Egy frakció térfogata 80 ml ' volt. Frakciók száma Súlya Biológiai aktivitása 1. -- 8. 0,62 inaktív 9. -- 16. 0,52 600 y/m 17. -- 28. 2,20 1000 y/m 29. -- 40. 1,92 •900 y/m 40. -- 48. 0,24 400 y/m; A megfelelő egyesített frakciókat savval 5 pH-ra állítva vízig oldószermentesítettük, majd aiz aktív anyagot 4 pH-n etilacetátban ráztuk át. Szárítás után az oldószert szárazra pároltuk, és a maradékot petroléterrel eldörzsöltük. Az 1. példa szerint készített inokulum-tenyészettél ioltotit 100 1 hasznos térfogatú készülékben 48 órán keresztül fermentáltuk, majd ezzel a fermentátummal oltottunk 1000 1 hasznos térfogatú fermentort. Táptalaj-összetétel: Szójaliszt Ku'koiricalékvár 2,0% 0,2% (50% szárazanyag tartalom) Kazein-hidrolizátum 1,0% (10% kazein) NaOl 0,3% CaC03 0,5% Glükóz 3,0% Pálmaiölaj 0,2% Víz 92,8% pH 6,8—7,2 siteriliezés előtt. 50 55 60 4. példa A 3. példa szerinti módon előállított oileficinből 1 g-ot 1 liter,'2%-os nátriumhidrogénkarbonát oldatban Ikevertetés közben feloldottunk, majd szűrés után közvetlenül használtuk fel az így kapott oileficin-nátriumsó-oldatot. A nátriumsó vákuumban szárazra párolás útján kvantitatív hozammal nyerhető ki. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás olieficin és sói előállítására mikrobiológiai úton, azzal jellemezve, hogy az előállítást előfermentáció után komplex fehérjét. 65 szénhidrátot és szervetlen sókat tartalmazó táp-4 I
