157984. lajstromszámú szabadalom • Eljárás parvulinok előállítására

157984 Az egyes komponensek baktériumellenes hatása között nincs jelentős különbség. A panvulinok lnitraperiitoneállis toxicitás-értéke (LD50) beltenyésztett CBA egértörzsön vizsgálva 300 mg/kg. A találmány szerinti eljárásit közelebbről az alábbi kiviteli példákkal szemléltetjük: A fermentációs paraméterek a következők voltak: levegő 700—800 liter/perc, keverő fordulatszáma 270/pere, hőmérséklet 26—30 C° (célsze-5 rűen 28 C°). A 96. órában az antibiotikum-tartalom 1800—^2100 y/mi volt. A 2400—2600 y/ml maximális antibiotikum-szintet a 120. órában értük el. 1. példa A Streptomyces parvulus var. parvuli spóraszuszpanziójávail (a spóraitermelés burgonyakivonait^glükóz-agiairon •történt a szokásos imódon) beoltottunk 5 db 500 mitres Erlenimeyer-lombikban levő alábbi összetételű táptalajt: 2,0% szójalszt 1,0% kazein (10% szárazanyag-tartalom) 0,2% kukoricalekvár (50% szárazanyag-tartalom) 3,0% glükóz 0,3% NaCl 0,5% CaíCOs. A pH sterilezés előtt 6,9—7,0 volt, A tenyésztés 28 C°-on történt. A fermentátum a tenyésztés 46—54. órájában érte el az 500 y/ml antibiotikum-tartalmat. A meghatározás biológiai értékméréssel B. subtil'is ATTC 6633 jelzésű törzzsel szemben, pH=8-n történt a szokásos módon (Horváth, I., Wix, Gy.: Acta Physiol. Hung. 4, 435 (1953)]. A tenyészet 9—10 napig —14 — -—!l6 C°-on tárolható, termelőképessége nem csökken. 2. példa A Streptomyces parvulus var. parvuli (I—327) spóraszuszpenziójával beoltottunk 100 liter hasznos térfogatai üzemi fermentürt, melynek •táptalaj-összetétele a következő volt: 2,0% szójaliszt 1,0% kazein (10% szárazanyag^artailom) 0,2% kukoricalekvár (50% száraizainyagtartalöm) 4,0% glükóz 0,3%NaCl 0,5% CaCO:j belefőzve 0,3% pálmaolag habzásgátló. A pH sterilezés előtt 6,5—7,0 volt. A sterilezés Í21 C°-on 30 percig történt. A gillükózt külön siterileztük. Az átáramoltatott levegő térfogata percenként 100 liter, a keverő fordulatszáma 250/perc volt. A fermentációs hőmérséklet 26—30 C°, optimáfean 28 C°. 48 órán át történő fermentálás után továbboiltottufc 1000 literes hasznos térfogatú fermentorba optimálisain 5—10% inokulúmmial. A fermentor táptalajösszetétele, valamint pH-ja azonos volt a fentivel. 15 3. példa 100 liter erjeszitéses oldat — melynek antibiotikum-tartalma 1000 j'/ml — pH-ját telített vi-10 zes oxálsav-pildatttal 3,4—3,6^ra állítattuk be, majd az oldatot szűrtük. A sejtálilományróil az antibiotikumot súlyára számított kétszeres térfogatú acetonnal kivontuk. Az acetonos kivonatot csökkentet nyomáson l/lO-ére pároiuk be. Az 20 így kapott vizes sűrítményből a hatóanyagot pH 3,3—3,6-on, a sűrítmény térfogatára számított, egyszer V3 térfogatú butainolllal vontuk ki. A bután ollós oldatból a parvu'lint átráztuk a butano! térfogatára számított, kétszer V» térfogatú télí-2S tett nátriumhidrogénkarbonát-oldatba, majd a hatóanyagot a pH-nak 3,3—3,6-ra történő visszaállítása után a vizes fázis térfogatára vonatkoztatott egyszer 7.3 térfogatú butamoilllal vontuk ki. A buitanoios oldatot csökkentett nydmáson bepá-30 roltuk. A bepárlási maradékból a hatóanyagot etillaoetáttal kicsaptuk. A kapott termék súlya 51,90 g. Kitermelés: 52%. 33 55 4. példa 1000 liter 1500 y/ml antibiotikum-tartalmú erjesztéses oldatát 3,4 pH^n szűrtünk. A szűrt erjesztéses oldat sejtállományáról a micélium sú-4Q lyára számított kétszeres térfogatú metanollal kivontuk a hatóanyagot, majd csökkentett nyomáson 1/10-ére töményitettük be. Az így kapott vizes sűrítmény pH-ját telített ínátriumhidrogénkarbonát-oldatal pH=7,0->re áiíottuk, majd ke-45 vertetés közben fcalciumkfliorid-oldiatot adagoltunk hozzá (a CaCl2 hozzáadagolás aránya 1 liter sűrítmény/25 ml telített ÖaC'k-oldat). Az így leválasztott Oa-sót szűrtük, vízzel, majd acetonnal mostuk, és szárítottuk. A kapott antibio-5Q tikum Ca-söjának súlya 1620 g (50% hatóanyagtartalmú). Kitermelés: 54%. 5. példa A 3. példában leírt módon előállított, ill. tisztított antibiotikum-keverék 20,0 g-ját szilikagéloszlopon adszorpciós kromatográfiával komponenseire bontottuk. Az oszlop készítéséhez 1 kg 60 Koch-Light Laboratories LTD gyártfaiányú Silioa-Gel-t !(10/2.00 mesh számú) használtunk. 200, egyenként 350 ml-es frakciót szedtünk; az eluálásrt 10% metanolt tartalmazó kloroformmal kezdtük, majd ,5%-onként haliadtunk 50% meta-65 nol-tartalmú kloroform-elegyig, ahol az dluálás 4