157693. lajstromszámú szabadalom • Stabilis reagens-elegy
157693 10 4. reagens: 0 ml A. oldalt + 3 ml B. oldat (A reagens mannit koncentrációja 100 mg/lml) A reagenseket megfelelő küvettakba visszük, majd 37 C°-oa 10 percen át dőinikubáljuk. Ezután 415 m^-on leolvassuk és feljegyezzük az optikai sűrűséget. Az enzimaitikus reakciót 20 milkraliter Hyland Abnormal szérum. (Loft=jj=368A16) hozzáadásává indítjuk meg. 10 A szérum alkalikus fosafaMz aktivitása: 8450 N. E. Kitér szérum. A reakció megindítása után 10 iés 15 perccel újra leolvassuk az okiatok optikai sűrűségét. így az optikai sűrűség változása: A15 '—AIQ' 5 perc Reagens Ao, Aio, A«, A /perc Számított N. E. %^os sebesaégnörwekedés a 2. reagenshez képest 1 — — 2 3 4 0,051 0,051 0,051 0,480 0,560 0,652 0,645 0,772 0,932 Az eredmények azt igazolják, hogy a mannit növeli a reakciósebességet 'és az érzékenységet. 6. példa: 25 0,033 279 — 0,042 355 27 0,056 473 70 A 'meghatározáshoz egy tablettát, amely 137 mg reagens-kevetiékeit (tartalmaz, kvarc küvettában 3,0 ml desztillált víziben feloldunk ós megmérjük az oldat optikai sűrűségét 415 m^,on. Vizsgálandó minták alkalikus foszfatáz afctivitásának meghatározása. A 4. példában megadoitit reagens alkotórésziekéit összekeverjük, így tablettázásra vagy kapszulákba való kiszerelésre alkalmas száraz keverékeit kapunk. Az oldathoz ezután hozzáadjuk a vizsgálandó szérum minita 0,020 ml-ét. Az elegyet 37 C°-on 30 infcuháljuk. A szérum minita hozzáadása után 10, 20 és 30 perccel rendre lemérjük az optikai sűrűség változásait 415 nift hullámhíoszszon. A vizsgálandó minita nemzetközi egységben mért alkalikus foszfatáz aktivitását a nemzetközi egység liter szérum AA415 m./* össztérfogai perc 1000 17,7 ml szérum a 4. példában már ismertetett egyenlet szerint számítjuk ki. 7. példa: A fenti meghatározást elvégeztük különböző aktiivátorokfcal. A méréseket ugyanúgy Gilford 2000 típusú spektrofotométeren, 415 m/x hullámhosszon, 37 C° hőmérsékleten végeztük. 0,050 ml humán szérumolt összekevertünk 3,0 ml vízzel, amelyhez előzőleg 0,5 mmól afctiyátort adtunk, és 10 perc múlva meghatároztuk az optikai sűrűséget. Az egyes akttvátorokkal kapott eredményeket az íalálbbi táblázatban adjuk meg: Akitivátor Mg/ml reagens Optikai sűrűség 10' múlva %-os sebességnövekedés Összehasonlító — 0,118 — mannit 91 0,188 59 szorbit 91 0,214 81 szacharóz 171 0,142 20 glicerin 46 0,184 56 45 50 55 60 65 A táblázat adataiból kitűnik, hogy a felsorolt aktivátorok növelik a reakció órzékenysé^gét. Szabadalmi igénypontok: 1. Reagens alkalikus vagy savas foszfatázok meghaitározására biológiai folyadékokban, az zal jellemezve, hogy,száraz alakban a) p-nitrofenilfoszforsav valamely szerves aminnal alkotott sóját, valamint b) egy pufféit, előnyösen valamely alkálifémkarbonátolt vagy -hiidrogénkarbonátat, így dináltriumfcarbonátot vagy nátriumhidrogénkarboniátot, és c) valamely magnézium-sót tartalmaz. (Elsőbbsége: 1966. november 14.) 5
