157650. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus anyag, valamint ez anyag származékainak előállítására
157650 21 22 liumfoszfát, 2% agar, csapvíz. A lombikot 43 órán át 28 C°-on 30 mm exeentrilcitású rázógépen 220 fordulait/peire sebességgel inkubáljuk. ,300 ml-es Erlenmeyer kombik reproduktív fázisának beoltására 2 ml, a fenti módon tenyésztett vegetatív közegeit 'használunk fel. A reproduktív fázis mennyisége 60 ml, és összetétele a következő: 6% glüikóz, 2,5% száraz élesztő, 0,2 % nátriumkloirid, 0,1% ibikáiliumfoszfát, 0,2% kaMumkarbonát, 0,01% magnléziumszul'fát, 0,001% ferroszulfát, 0,001% cinkszüllíát, 0,001 % T-éaszullfát, esapvíz. Az elegy pH-ja 7. A közeget 20 percen át 120 C°-on sterilizáljuk, a glükózt 20 percen ált HO C°-on külön sterilizáljuk. A kapott tenyészeteit 28 C°-ion a vegetatív közegnél ismertetett körülmények között inkubáljuk. Az antibiotikum, a fermentáció 6. napján éri el a maximális koncentrációt. Az ez idő alatt előállított Adriaimycin IS /tg/ml koncentrációnak felel meg. 2. példa: Az 1. példában ismertetett kísérleteit (hajítjuk végre, azzal a különbséggel, hogy az oltótenyészelteit a következő szilárd közegen tenyésztjük: 200 g hámozott burgonyát 20 percig 500 ml vízben főzünik, a térfogatot az eredeti érteikre állatjuk be, és gézen szűrjük. A szűrldthez 2% glükózt, 0,il%, Diifoo-éöesztőex'traiktot és 2%. agart adunk. A táptalaj Végtérfogatát 1000 mlnre 'állítjuk -be, és 20 penoen át 120 C°-on sterilizáljuk. A táptalaj pH-értéke 6,8—7,0. Az Adíriamyciin maximális koncentrációja 12 fig/ml, és ezt az értéket a 140. órában éri el. 3. példa: A 2. példáiban ismertetett kísérletet végezzük el azzal a különbséggel, hogy a következő összetételű vegetatív és reproduktív közeget . alkalmazzuk: Vegetatív köaeg: 3% keményítő, 0,4% kalciumkairbonát, 0,3% törköly, (distillers solubles), 0,1% ammóniumszulfát, 0,5% kazein, 0,01 % bikáliiumfioBafát, esapviízben. Az autoklávbam 20 percem át li20 C°-ion sterilizált táptalaj pH-ja 7. Reproduktív közeg: 5% keményítő, 0,8% kaldumkartboinát, 0,6% kukoirioalekvár, 0,5% kazein, 0,1% ammóniumszulfát, 0,01% ibikáliumfoszfát. A közeg pH-ja sterilizálás után 7. A sterilizálást vegetatív közeg előállításánál ismertetett módon végezzük. A maximális termelés (6,5 ^g/tml) a 7. napon érjük el. 4. példa: 500 ml vegetatív fázisként felhasználható közeget — amelyet az 1. példa szerint állítunk elő — 2000 ml-es Pyre^üveglomibibban az F. I. 106 változat tenyészetével oltunk be. A 2. példa szerinti szilárd közegű tenyészetet alkalmazzuk. A tenyészetet ezután 48 órán át 3,5 mm exoentriicitásiú forgó rázógépen 120 fordulat/ 5 peine sebességgel 28 C°-on inkubáljuk. 100 ml kapott tenyészettel 3000 ml azonos folyékony közeget oltunk ibe. A fermentációt propelleirkev©rő alatt végződő, levegő bafúvatájsára szolgáló bevezető csővel, hullámtörő berendezéssel, 10 oltóűsővel, levegfíkivezetőcsőve'l, hőmérsékletellenőrző berendezéssel, és szakaszos vagy folyamatos adagolásra szolgáló berendezéssel ellátott 5 literes semleges üvegfermentarhan végezzük steril körülmények között. A növekedés 28 C°-15 on 3 l/perc levegőztetesi sebesség és 400 ffioirdulat/pere keverési sebesség mellett folyik le. 300 ml fenti módon termelt tenyészettel a beoltás után 24 órával 0 1, az 1. példában is*-20 mertetett reproduktív közeget oltunk be. Ehhez a műveletihez az előzőekben ismertetett azonos üvegfermentoirt használunk fel. A fermentációt 350 fordulat/perc keverési sebesség és 5 l/pere levegőztetesi sebesség mellett hajt-25 juk végre, és a habzást kismennyisiégű szilikonhabziásgátlóyal szabályozzuk. A fermentáció a termelési maximumot 150 óra múlva éri el, amely 6 ,ug/ml Adriamycin kioníceintráiciónak felel meg. 30 5. példa: 2000 mines lombikban az 1. példában leírt 35 módom előállított tenyészettel 500 ml, alábbi összetételű közeget oltunk be: 0,6% pepton, 0,5% granulált száraz élesztő, 0,05% vizes kalciummiítrát. A közeget 48 órán át 28 C°-on forgó rázógépen keverjük. Az így kapott tenyé-40 szeittel 80 literes fermentoirban 50 1, fent isimertetett közeget oltunk be. Ezt a közegiet 230 fordulat/perc sebességgel keverjük, és 27 C°-on 0,7 1/1 közeg/perc sebességű levegőárammal levegőztetjük. 4—5 óra elteltével a kapott tenyé-45 szetet 800 l-es farmentorban 500 ml táptalajhoz adjuk. A ifarmantációs közeg összetétele a következő: 7% glükóz, 6,165%. borsólis^t, 0,2% kalciumkarbonát, 0,2% nátóumkloriid, 0,1% bikáliumifosz-50 fát, 0,02% magnéziumszulifát-heptahidrát, 0,000(68% fiamoszullfát-iheptalhádrát, 0,0011% mangánsizuDfát4ieptahidirát, 0,)002% rézszulfát, csapvíz. A közeget 30 percen át 120 C°-on starilzál-55 juk, 27 C°-na hűtjük, a baoMs után 250 fordulat/perc sebességgiel keverjük, és 0,4 1/1 közsg/penc sebességű levegőáramimal levegőztetjük. A tenyészet 145 óra elteltével 6,5 jug/ml mennyiségű Adriairnycinit tartalmaz. 60 6. példa: 60 1, a 4. példa szerint végrehajtott férmen-65 táció után kapott kultúrát SuperoelR -lel meg-11
