157600. lajstromszámú szabadalom • Eljárás grizeofaginok előállítására
9 157600 10 Mikroorganizmus Staph, aureus 53* Staph, aureus 80/81** Staph, aureus 1115** B. subtilis ATCC 6333 Sarcina lutea Streptococcus faecalis Pseud, pyocyaneus E. coli 4R*** * = polirezisztens törzsek (rezisztensek penicillinekkel, streptomicinnel és polimixinnel szemben) *.* = penicillin-rezisztens törzsek *** _ penicillin és eritromicin-rezisztens törzs. A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákkal szemléltetjük: 1. példa: A Streptomyoes griseus var. griseofagini (S— 298) spóraszüszpenziójával (a spóraitermelés burgonyákivomat-glükóz agáron történt a szokásos módon) beoltattunk 2 db 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő alábbi összetételű táptalajt (100 ml): 2% szójaliszt 3% glükóz (külön sterilezve) 0,1% kazein-hidrolizátum (kazeinre számítva) 0,3'% NaCl 0,5% CaC03 A pH sterilezés előtt 6,8—7,0 volt. Az indkulum-tenyészetet 48 órán át rázattuk 28 C°-on síkrázógépen, majd ebből az előfermentációból 100 liter hasznos térfogatú üzemi íermentort oltattunk be, melynek táptalaj-öszszetétele a következő volt: 2 % szójaliszt 3 % glükóz (külön sterilezve) . 0,1% kazein-hidrolizátum (kazeinre számítva) 0,3% NaCl 0,5% CaCC-3 belefőzve 0,3% pálmaolaj habzásgátló. Adagolásra a szokásos módon ugyanennyit készítettünk elő. A pH sterilezés előtt 6,8—7,0 volt. A táptalaj sterilezése 30 percen át 121 C°-on történt. A fenti inokulummal való oltás után a tenyésztést 28 C0 -o,n végeztük a szokásos módon, keverés közben. A fermentort 100 l/perc sebességgel levegőztettük. A fermentátum a tenyésztés 96. órájában 100 //g/ml antibiotikumot tar-Minimális gátló konc. y/ml Grizeofagin AB C 0,08 0,4 <0,4 0,16 0,4 <0,4 0,08 0,62 < 0,4 0,04 0,16 0,8 0,3 0,4 0,4 0,04 0,16 0,8 1,6 6,2 12,5 0,4 1,6 ' 3,1 15 talmazott. A meghatározás biológiai értékmérésse'l Bac. subtilisen történt a szokásos módon. (Horváth, I., Wix, Gy.: Acta Physiol. Hung. 4, 435 [1953]) 20 2. példa: A Streptomyces griseus var. griseofagini (S— 298) spóraszuszpenziójával beoltottunk 100 liter hasznos térfogatú üzemi fermentort és az 1. pél-25 dában megadott módon 48 órán át tenyésztettük, majd tovább oltottuk 1000 liter hasznos térfogatú fermentorba, amelynek táptalaj-összetétele a következő volt: 30 ,2 % szójaliszt 3 % glükóz (külön sterilezve) 0,1% kazein-hidrolizátum (kazeinre számítva) 0,3% NaCl 0,5% CaC03 35 belefőzve 0,3% pálmaolaj habzásgátló. Adagolásra a szokásos módon ugyanennyit készítettünk elő. A pH sterilezés előtt 6,8—7,0 volt. 40 A szokásos módon végzett fermentáció 72. órájában az antibiotikum-termelési szint 150 jMg/ml volt. 3. példa: 45 100 liter erjesztéses oldat — melynek antibiotikum-tartalma 130 jug/ml — pH-ját szilárd oxálisavval 3,5^-re állítottuk be, majd az oldatot szűrtük. A szűrt erjesztéses oldatból pH = 7,8— 50 8,2-n (a pH beállítása szilárd szódával történt) az antibiotikum-ikomplexet 2X15 liter etilacetáttal kivontuk. Az etilacetátos kivonatokat egyesítettük, majd csökkentett nyomáson 3 li-, térre pároltuk be. Az így kapott sűrítményből a 55 teljes aktív anyagot 2X800 ml pH 5,0-s (Mc Ilvaine-féle) puffer elegybe vittük át, majd az antibiotikum-komplex pH-ját telített szódaoldattal 7,8-ra állítottuk vissza, és az anyagot 2X500 ml etilacetáttal kivontuík. Az egyesített 60 etilacetátos kivonatokat nátriumszulfáton szárítottuk, majd szűrés után 50 ml-re pároltuk be csökkentett nyomáson. A bepárlási maradékból a komplexet 200 ml petroléterrel kicsaptuk. A mindhárom komponenst együtt tartalmazó ter-65 mék súlya 6,74 g. Kitermelés: 52%. 5
