157552. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kristályos adenozin-5'-foszfát előállítására
7 A csapadékot 280 ml desztillált vízben finoman szuszpendáltuik és H2S gázt vezettünk a szuszpenzióba a csapadék megfeketedéséig, majd további 1 órán át folytattuk a gáz bevezetését (összesen 3 óra). A csapadékot centrifugáltuk, majd dekantálás után 120 ml forró desztillált vízzel mostuk. Az egyesített oldatokat a kénhidrogén elűzése céljából levegővel átíbuiborékoltattuk és G—4 jelzésű üvegszűrőn megszűrtük (375 ml). Az oldathoz zavarosodásig keverés közben aoetont adagoltunk (1 liter), majd 4—5 C°-on tartottuk 1 napon át. Ezután további 200 ml aoetont adtunk hozzá es új'ábib 1 napos hűtés után a kivált kristályos csapadékot G—4 jelzésű üvegszűrőn szűrtük, 2X100 ml aoetonnal mostuk és levegőn szárítottuk. Kitermelés 4,1 g, az elméletinek 56%-a. Tisztasága AMP • i2iH2Ö-m számítva 96,5%; AMP-savtartalma 87% (megfelel 3,58 g AMP-savnak). 2. példa: Az 1. példában leírt minőségű 5,5 kg szárított lóhúsnák megfelelő 50 liter vizes kivonatból indultunk ki, melynek elméleti AMP savtartalma 40 g. Csökkentett nyomáson 40 C° alatti hőmérsékleten a kivonatot 9 literre koncentráltuk, majd 36 g p.a. minőségű kalciumhidroxid hozzáadása után 40 C°-on 24 órán keresztül inkubáltuk. Ezután a pH-t sósavval 8,2-re állítottuk be, a hidrolizátumot 70 C°-on 15 percig kevertük, majd a csapadék centrifugán történő elválasztása után 2X3 liter vízzel megismételtük a 70 C°-os, 15 perces extrakciót, 8,2 pH-n. Az egyesített oldatokat 15 literre kiegészítve, a pH-t ecetsavval 6-ra állítottuk be és 680 g Pb(II)-acetátot adagoltunk hozzá keverés közben 1700 ml 40%-os oldat formájában. 20%-os nátriumhidroxid oldattal a pH-t 7,6-ra állítottuk, 3 órán keresztül 4—5 C°-on tároltuk az anyagot. Ezután a csapadékot centrifugálva elválasztottuk és 2 liter desztillált vízzel mostuk. Az így nyert csapadékot 1600 ml desztillált vízben finoman szuszpendáltuk, az 1. példáiban leírt módon H2 S gázzal végeztük a megbontást, mosáshoz 800 ml desztillált vizet használtunk. Az egyesített szűrlet térfogata 2300 ml volt. Ezt, a már leírtak szerint 7 liter aeetonnal kristályosítottuk. Végtermék súlya 24,7 g, kitermelés 61,5%. Tisztasága AMP-2H2 0-ra 93%-os, AMP-savtartalma 84,5% (megfelel 20,8 g AMP savnak). 3. példa: A kiindulási anyag 100 g nyers ATP, ADP, AMP keverék, melynek nuMeotid tartalma méréseink alapján 36,3 g ATP; 16,6 g ADP; 3 g 8 AMP. Ebből számított elméletileg kinyerhető AMP 41,3 g. A 100 g nyersterméket 3 liter víziben feloldottuk, 85 g p.a. minőségű kalciumhidröxidot 5 adtunk hozzá és 40 C°-on 24 órán át hidralizáituk. Ennek leteltével 7 liter desztillált vizet adtunk hozzá, a pH-t 8,3-ra állítottuk sósavval. 20 perc alatt 70 C°-ra melegítettük és 15 percig ezen a hőmérsékleten kevertük, majd centrifu,0 gával elválasztottuk a csapadékot és ezt 3X4 liter vízzel 70 C°-on 15 percig keverve extraháltuk (pH 8,3). Az egyesített kivonatok térfogatát jégecettel 22 literre kiegészítettük, a pH-t 6-ra állítottuk és 1750 ml 20%-os Hg(II)-15 acetát oldattal (350 g) a higanysókat az elegy pH-értékéniék 20%-os nátriumhidroxid oldattal 7,5-re való beállítása útján leválasztottuk. 3 órán keresztül 4—5 C°^öm tároltuk, majd centrifugáltuk az anyagot és a csapadékot 1 liter ,0 desztillált vízzel mostuk. A megbontást az 1. példáiban leírtak szerint végeztük H2 S gáz bevezetésével, a csapadék szuszpendálásálhoz 1700 ml, a szulfidos csapadék mosásaihoz 800 ml desztillált vizet használtunk. Egyesített szűrlet 240O ml. A kristályosítást az 1. példával analóg módon végezve, 7,5 liter aoetont használtunk fel. 30 Végtermék súlya 25,4 g, kitermelés 61,0%. Tisztasága AMP • i2H20-r,a számolva 91,5%-os, AMP-savtartalma 82,5% (megfelel 20,9 g AMP savnak). Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás kristályos adenozin-5'-foszfát előállítására . izoimkiivonatból, vagy más adenozin-40 -5 '-tri-, adenozin-5'-di- és adenozin-ö'-foszfátot egymás mellett tartalmazó oldatból, adott esetben nyers adenozin-i5'-trifoszfát szu'bsztaneiábó] azok lúgos hidrolízise és a hidrolízis termékeknek oldhatósági viszonyok alapján történő szétválasztása útján, azzal jellemezve, hogy a kiindulási anyagot 100 C° alatti hőmérsékleten kalciumhidroxid jelenlétében hidrolizáljuk, a hidriolízis közben képződött csapadékot eltávolítjuk, — adott esetben a csapadékot vízzel kivonatoljuk és a kivonatot a megszűrt hidrolizátummal egyesítjük —, a hidrolizátum pH értékét 5,5 és 7 közötti értékre állítjuk be és az adenozin-5'-foszifátot ólom- vagy higanysó alakjában leválasztjuk, -majd a levált adenozin-5'-foszfát fémsót kérihidrogénnel elbontjuk, a fémszulfid csapadékot eltávolítjuk, és az oldatból az adenozin-5'-ífoszfátot kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy kinyerhető 60 adenozin-5-foszfátra számított 0,1—15,0 g/liter, előnyösen 0,6—1,0 g/liter, kiindulási töménységű adenozin-5'-tri- és/vagy adenozin-5'-difoszfátot és adenozin^5'-fosz<fátot tartalmazó 05 oldatot hidrolizálunk. 4
