157511. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai előállítására
y 157511 10 adtunk, 5 g száraz anyagra számított kukoricaáztatólevet tartalmazott. A közeg pH-jáit vizes nátriumhidroxid-oldaittal 7,0-ria állítottuk be, és 30 percen át 110 C°-on sterilizáltuk. Mindegyik 500 mPes lombik 100 ml táptalajt tartalmazott. Az inokulációs százalék 5% volt. 24 órai rázás után minden lombikba 50 mg Co012-6H 2 0 oldatált és 200 mg koleszterolt adagoltunk vizes szuszpenzió alakjában. 3 napon át végzett rázás után az 1. példa szerinti módon minden lombikból 32 mg 3,17-dioxo-l,4--androsztadiént izoláltunk. Kitermelés 22% a beadagolt koleszterolra számítva. 8. példa: A 7. példa szerinti módon Nocardia sp. (CBS Nr. 224,67) kultúrát készítettünk. Minden lombikhoz 200 mg kloszterolt és 15 mg CdSCvet adtunk. 24 órai rázás után az 1. példa szerinti módon vékonyrétegkromatográfiásan kimutatható a 3,17-dioxo-l,4^androsztiadién jelenléte. 9. példa: Nocardia sp. (CBS Nr. 224,67) vagy Nocardia sp. (CBS Nr. 225,67) kultúrát készítettünk a 7. példa szerinti módon. Mindegyik lombikba 200 mg koleszterolt és 3—10 mg (30—100 mg/l) nátriumszelenitet adtunk. 24 órai rázás után az 1. példa szerinti módon vékonyrétegkromatográfiásan kimutatható volt a 3,17-dioxo-l,4--androsatadién és 3,17-dioxo-4-androsztén elegyének jelenléte. 10. példa: A 2. példa szerinti módon Arthrobacter sp. (CBS Nr. 221,67) kultúrát állítottunk elő. A kultúrához koleszsterol helyett 200 mg ß-szitoszterolt adagoltunk. Az inhibitor NiSCv7H20 volt. 3 nap múlva a lombikok 19—24 mg 3,17--dioxo-l,4-androsztadiént tartalmaztak. Kitermelés kb. 15%, a beadagolt /?-szitoszterolra vonatkoztatva. (A kereskedelemben beszerezhető /?-szitoszterol több, gyakorlatilag azonos szerkezetű szteroidot tartalmaz, így. nem lehet a kitermelést pontosan meghatározni.) .11. példa: A 10. példa szerinti módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy az alábbi kultúrák egyikét alkalmaztuk: Artthrobacter sp. (CBS Nr. 222,67), ill. Nocardia sp. (CBS Nr. 226,67). Mindkét esetiben 3 nap múlva az 1. példa szerinti módon végzett vékonyrétegkromiatográfiás úton kimutatható volt a 3,17-dioxo-l,4--androsztadién jelenléte. A kiadásért felel: a Közgazda; •?008071. Zrínyi (T) Nyomda, Bu 12. példa: A 2. példa szerinti módon Nocardia sp. (CBS Nr. 225,67) kultúrát készítettünk 4 lom-5 bikban, mindegyik lombik 100 ml táptalajt tartalmazott. Mindegyik lombikhoz 50 mg CoCV •6H2 0-t adtunk. Mind a 4 lomibik tartalmához a) S-oxi^-kolesztén * b) stigmaszterol 10 c) 5a-klórkolesztanol vizes szuszpenzióját és d) koleszterilbetiainátklorid oldatát adtuk. Mindegyik esetben a lombikba adagolt szteroid mennyisége 100 mg volt. 2 nap múlva az 1. példa szerinti módon vég-15 zett vékonyrétegkromatográfiás úton kimutatható volt a 3,17-dioxo-l,4-&ndrosztadién jelenléte. 2Q Szabadalmi igénypontok: 1. A 155123 sz. törzs-szabadalom 1. igény-, pontja szerinti eljárás továbbfejlesztése olyan metil-ciklopentanoperhidrofenantrén alapszer„5 kezetű szteroidok előállítására, amelyek 3-as helyzetben oxo-, hidroxil-, alkoxi- vagy aeiloxicsoporttal és 17-es helyzetben OXQ- vagy hidroxilcsoporttal rendelkeznek, azzal a felté^ téllel, hogy ha a 17-es helyzetben hidroxilcso-0 port van, más szubsztituens nincs ebben a helyzetben, a fenti alapszerkezetű szteroid kiindulási anyagok mikrobiológiai konverziója útján, amely kiindulási anyagok 3-as helyzetben oxo-, hidroxil-, alkoxi- vagy aciloxi-csoporttal és 17-es helyzetben egy legalább 8-széniaítomos, /^-orientált alifás szénhidrogéncsoporttal rendelkeznek, szervetlen ion, mint inhibitor jelenlétében, azzal jellemezve, hogy a konverziót az Arthröbacter vagy Nocardia species enzimeivel valósítjuk meg. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy inhibitorként nikkel-, kobalt-, kadmium- vagy szelenitionokat alkalmazunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás 45 foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mikrobiológiai konverziót 4,0—8,5, előnyösen 7,0 pH-értékű közegben valósítjuk meg. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, 50 hogy az inhibitorkoncentráció 10—1000 mg/l. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike" szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a konverziót úgy végezzük, hogy az enzimet termelő mikroorganizmust kulkoricalek-55 várt és előnyösen élesztőextraktumot és/vagy glükózt tartalmazó vizes közegben tenyésztjük 20 C° és 45 C° közötti hőmérsékleten, levegőztetés közben, az inökuláció után 0—72 órával inhibitort és szubsztrátumot adunk a kultúrá-60 hoz és a szubsztrátum inkubációját 1-^5 napon át folytatjuk. igi és Jogi Könyvkiadó igazgatója, apest V., Balassi Bálint utca 21—23. 5
