157415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azok származékainak szabályozott szintézisére

.157415 14 ioncserélő gyantákon vagy molekulaszita-tulajdonságú kromatográfiai anyagon, minit amilyenek például a különböző alakokiban beszerezhető térhálósított dextránok, így pl. a Sephadex (A.B. Pharmacia, Uppsala, Svédország). 5 Egy igen előnyös módszer abban áll, hogy a végteirméket könnyen eltávolítható „kezelő csoporttal" állítjuk elő, pl. erősen íbázikus csoporttal, amilyen a bázisos csoport argininen, amely könnyen reagál ioncserélő gyantával 10 vagy egyéb reagenssel, és így a kívánt termék elkülöníthető az arginint nam. tartalmazó melléktermékeiktől.. Ezután eltávolítjuk a kezelő csoportot. Például, ha a kívánt termék hexapeptiid, célszerű heptapeptidet készíteni argi- 15 •nínnel mint kairboxi-terminálds .aminosavval. Az airginin erősen íbázikus sajátságú, és ennék eredményéként a iheptapeptid könnyen adszorbeálható katlioincserélő gyantán, aminek révén elkülöníthető a melléktermékektől. Ezután a 20 heptapeptidet elüáljuk és a kariboxipeptidaz-B enzim hatásának tesszük ki, amely enzim szelektíven eltávolítja az arginint és így a kívánt hexapeptidet hagyja vissza. 25 Az arginin kezelő csoport olyan polipeptiiidek készítésekor is hasznos, amelyek, előállításakor N-ikarboxialnihidrid-ifelesleg.st használunk. Ha egy korábbi reaíkoiólépésSben N-lkarbonsavanhidridet vagy arginint adtunk a poldpeptid- SO lánchoz, vagy ha arginin a kariboxi-terminális aminosav, a kapott poilipeptidntermék, amely arginint tartalmaz, olyan fizikai és kémiai tulajdonságokkal fog rendelkezni, amelyek lehetővé teszik bármelyik nem-kívánatos mellék- 35 terméktől, különösen azoktól való könnyű elkülönítését, amelyeik egy vagy több lépésben anhidrid-felesleg használataiból származnak. A termék a fentebb leírt módon különíthető el, és kívánt esetben a karboxi-tarminális arginin 40 karboxipeptidáz-B-vel eltávolítható. A termékek elkülönítésére különösen előnyös módszer a kapilláris kromatográfiai technika". Ez az eljárás hasonlít a nagyüzemű vékony- 45 réteg-kromatográfiaihoz. Célszerű a vékonyré-teg-kiromatogmáfia feltételeinek reprodukálása minél nagyobb mértékben, de nagyobb reagensmennyiségekkel. Az adszorbens és az aminosav vagy peptiid arányát azonos értéken tart- 50 juk. Ebben az eljárásiban egy kolonnát sziilikagéllel, cellulózzal vagy egyéb megfelelő adszorbenssel töltünk meg. A peptidiet tartalmazó oldatot a kolonna alsó részével éirintikeztetjük és 55 előhívjuk. Megfigyeltük, hogy a reakcióelegy komponenseinek R/-értékei lényegileg megegyeznék ugyanezeknek a komponenseknek vékonyréteg^kroimatográfiávál meghatározott R/értékeivel. Ezután a kívánt terméket tartalmazó 60 kolonna imagfelelő részét -— amelyet korábbam vékonyréteg-módszerrel határoztunk meg — egyszerűen kivágjuk és elüáljuk. Egy változat abban áll, hogy a kolonna felületét beipermetezzük ninhidninnel vagy vala- 65 milyen egyéb olyan reagenssel, amely színváltozást idéz elő, és így alkalmas a termék helyének a meghatározáséra. Ezután a kolonnát feldaraboljuk, az elszíneződött felületi réteget lekaparjuk, és a terméket a megfelelő rész megmaradó részéből elüáljuk. A találmány szerinti eljárás használható mind természetes, mind szinietiitouis aminosavakra és peptidékire, azoknak mind jioiblbraforgató, mind balraforgiató alakjára. Felhasználható olyan vegyületekre is, amelyek a kívánt peptid-lkötés amino- vagy karbaxil-csoportrjától eltérő egyéb funkcionális csoportokkal rendelkeznek, így tiinozin, arginin, teronin, gkitaminísav és hasonlók esetében. Az eljárás alkalmiazihatő olyan száirtmazékok esetiéiben is,' amelyekben ezeket a további funkciós csoportokat a pepiid-képzést , követően könnyen , eltávolítható csoport köti le, amilyenek pl. az im-foenziljbisztíidin, a trifluoir-acetiilszardn vagy a tefrahidröpiranil-tiiirozin N-fcariboxi-anhidridjeii. A „származékok" kifejezés alatt a találmány oltalmi körén belül írniindazokat az amidökat, észtereket, és a természetes aiminosaivak homológjai és analógjai kar.boxiil-csoiportijának egyéb funkcionális módosulatait értjük, amelyekben egy vagy több hidrogénatom szubsztituiálva van pl. rövidszénláncú alkil-esopoirttal, amilyen pl. az a-imetilleu'ciin vagy az cHfliuor-glicin. Ezek az utóbbi vegyületek különösen hasznosak a szerkezet és az aktivitás összefüggéseinek elemzéseltoir fiziológiailag aktív proteinekben, így hormonokban, továbbá amikor az ilyen aktív proteinek antagonistáit állítjuk elő különböző gyógyászati felhasználásokhoz. A találmány felhasználható primer és szekunder aminők, tioaikdholdk, valamint foszfor-tartaknű savaikból kapott vegyületek, így foszfátészterek fiziológiailag aktív származékainak az előállítására is. Szerkezetük következtében bizonyos aminosavak a találmány szerinti eljárásban speciális megfontolást igényelnek. Ä hisztiidin N-lkarboxi-arihidridjének imidazol-nitrogénatomlát a reakciót megelőzően védeni lehat im-ibenzil-származék kialakítása útján, amelyet hidrogénezéssei, vagy pedig folyékony ammóniáiban nátrium segítségével lehet eltávolítani a pepiidről. Úgy tűnőik, hogy ennek az aminosavnak az imidazol-ícsoportja nem gátolja az anhidradékkel végbemenő további reakciókat, mihelyt a peptiid kialakult. A szerin- és a treonin-anhidrid hidDoxi-^csopariját oélszeírűen leköthetjük oly módon, hogy a megfelelő N-kairboxi-anihidridek trifluoraicetil- vagy tiriklőracetil-isziármazékait képezzük. Ezek a csoportok különösen előnyösen használhatók, minthogy a pepiid kialakítása köziben hrdrolitikíusan eltávolíthatók. Hidroxíl-esopoív tokát védeni lehet éterek, így pl. benziléter, te.trahiidropiraniléteir vagy egyéb acetál vagy ketál kialakításával. 7