157415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azok származékainak szabályozott szintézisére
39 első ír akciók fenilalanint tartalmaznak, a középső frakciók a kívánt terméket tartalmazzák, míg az utolsó frakciók reagiálatlan szerint tartalmaznak. Egy hasonló kísérletben a dioxánt etilaeetáttal helyettesítjük. Dekarboxilezés után az etilacetát-réteget elkülönítjük, és a terméket az előző műveletihez hasonló módon nyerjük ki a vizes rétegből. 19. példa: Argiml-'prolilHprolil-glicil-fenilalanil-szeril-prolil-fenilalanil-arginin előállítása Szeril-prolil-fenilalanil-arginin lö,7:5 g arginin-BCl-t (75 millimól) oldunk 2,62 liter '10-as pH-jú nátriuimiborát pufferben. A pH-t tömény kénsawal 3-ra állítjuk be, és 10 percen át nitrogént bubarékoltatunk át az oldaton. A pH-t 50%-os nátriuim-lhidroxid pl•dattal 10,2-re növeljük, és az oldatot 0 C°-ra hűtjük. 40:0 g jeget adunk az oldathoz, majd 20:0 ml aoetonban oldott 82,5 millimól NJsarboxinfenilalaínin-anhidiiidet adagolunk hozzá. Az oldatot egy peroan át élénken keverjük, majd pH = 3-ra savanyítjuk, és 10 peroen át nitrogént büboréko Itatunk at rajta. Ezután a pH-t 9.5-re állítjuk be, és 150 ml acetoniban 15,9 g (112,5 millimól) N-karboxi-prolinanhidridet, valamint a hőmérsékletnek 0 C°-on való tartása céljából 400 g jeget adunk az oldathoz. Egy percig tartó élénk keverés után a fenti módon dekariboxilezóst végzünk. A terméket nem különítjük el. Az eljárást 9,3-as :pH-n megismételjük olyan módon, hogy 150 ml aoetonban 34 g (150 millimól) O-trifluoracetil^NHkarboxi-szerinanlhidridet adunk a reakcióelegyhez. Egy percen át tartó keverés után a pH-t 7-r>e állítjuk be, majd a reakcióelegyet fagyasztva szárítjuk. Az összes szilárd anyagot metanollal háromszor extraháljuk, és a metanolois extráktumokat s-zilikagélen adszafibeáltatjük, majd a szilikagéit megszárítjuk. Ezután a száraz szilikagéit izopropanollal készített szilikágél-oiszlopra -visszük ifel. Az 'oszlopot 'metanollal, vízzel és ammóniával <80 : 18 : 2) készített eleggyel hívjuk elő. A kívánt tatrapeptidet a 18—21. frakcióikból különítjük el, és szerkezetét Spinioonanaiizissel erősítjük meg. Fenilialanil^szeril-pirolilHfenilalanil-angiiiin 1,8 g (3,56 millimól) szeril-prolil-fenilalanil-arginint oldunk 125 ml 9,5-iös pH-jú nátriumborát-puifíeríben, amelyet i0 Cq-ra hűtünk, majd a hőmérséklet tartása céljából 70 g jeget adunk az oldathoz. 755 mg (3,92 millimól) N-kanboxi-íeníilalaninaníhidiridet acetonhan oldunk, és ezt az oldatot éleink keverés közben a pufferolt oldathoz adj:uk. Az oldat pH-ját 7-re állítjuk be, és az egész reakcióelegyet 40 ml szénoszlopra 40 visszük fel. Az oszlopot 500 ml vízzel mossuk, majd ammóniurnlhi'droxid oldattal eluáljuk mindaddig, amíg a frakciók ninihidriimel már negatív próbát adnak. 5 A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat fagyasztja szárítjuk. A szilárd maradékot szilikagél-oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot 8 : : 3 : 1 anányú szek.ibütanoi-víz-acetsav eleggyel 10 hívjuk elő. A kívánt pentaipeptidet a 6—9. frakciók tartalmazzák. A termék szerkezetét Spinco-analízis 'megerősíti. Prolil-prolil-gliein 15 1,5 g (20 millimól) glicint oldunk 250 ml 10-es pH-jú nátriumborát puff erben, és az oldatot 0 C°-ra hűtjük le. 50 g jeget, majd 20 ml acetoniban 2,82 g (20 millknól) N-ikarboxi-pro-20 linanhidridet adunk az oldathoz. A reakcióelegyet egy percen át élénken keverjük, majd a pH-t tömény kénsawal 3-ra csökkentjük. 10 percen át nitrogént buborékoltatunk át az oldaton, és a pH-t 50%-os nátriumhidroxid oldat 25 hozzáadásával 10-es értékre állítjuk be. Az oldatot 0 C°^ra hűtjük, majd 50 g jeget és 25 ml aoetonban 3,1 g (22 millimól) N-karboxi-prolin-anlhidri'det adunlk hozzá. Egy percen át végzett keverés után a pH-t 7-re csökkentjük, és a re-Z0 akcióeiegyet ifagyasztva szárítjuk. A terméket háromszor 25 iml 'metanollal extraháljuk, és a metanolos extráktumokat IRC 50 gyantán adszorbeáltatj'uk. Az eluálást vizes ecetsavval végezzük. A terméket vizes aoetomból átkristá-S5 iyosítjük. Az elkülönített prolilnprolil-glieiníből 2,5 g-ot (9,3 millimól) oldunk 2,5 n nátriumhidroxid oldatban olyan módon, hogy az oldat pH-'ja 40 10 legyen, és közben az oldat hőmérsékletét 0—'5 C°-on tartjuk. Cseppenként 1,75 g (10,4 millimól) íkarb'OÍbeinzoxikloridot adunk az oldathoz erős keverés közben. A hőmérsékletet 0 C°-on, a pH-t pedig 10-es értéken tartjuk 2,5 n 45 nátriumhidroxid oldat hozzáadásával. Amikor a pH állandó imarad, a reakcióelegyet további 30 percen át keverjük, majd kétszer 10 ml éterrel extralháljuk a savklorid [fölöslegének eltávolítása céljából. Kongóvörösre megsavanyít-50 ju!k az oldatot 2,5 n sósav oldattal. Az ekkor elkülönülő olajat kloroformból átkristályosítjuk. 2,85 g (7 miiilimól) karbobenzoxi-prolil-iprol'íl-glicint oldunk 15 ml dioxánban, és 800 mg 55 (7 millimól) hidroxi-lborostyánkősavimidet adunk az oldathoz. 1,4 g (7 millimól) N,N-diciklohexil-karfcodiimidet adunk a reaíkeióelegylhez, majd éjjelen át hűtjük. A diiciklohexil-karbamidot szűrjük, majd dioxénnal mossuk. A szűredéket 80 °la JJá töményítjük, amelyet etilacetát és petroléter elegyéfoől átkristályosítunk. 652 mg (1 millimól) pentapeptid plusz 168 mg (2 millimól) nátriumhidrogénikarbonát 2 ml vízzel készített oldatához 50 mg (1 millimól) kar-65 bobenzoxi-iprolil-prolil-gliem N-hidroxiboros-20
