157367. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gibberellinsav biztonságos termelésére
9 157367 10 számát (1,'8-ilO6 csíra/nil). Ezután a szuszpenziót 1 ml-kint sterilen beampulláztuk. Az ampullákat ezután 1 órán át vízfürdőn, 75 C°-on tartottuk. Szobahőmérsékletre történt lehűlés után az ampullák tartalmát 100.000-szeresre hígítottuk steril csapvízzel, majd a hígításból terítést készítettünk kukoricaliszt-malátakivonat-agar táptalajra. 9 napon át 28 C°-on végzett inkubáció után a túlélő telepeket megvizsgáltuk gibberellinsav termelésre. A szelekciós célnak leginkább megfelelő törzset szubmerz tenyészetben is megvizsgáltuk. Ez a törzs kukoricaliszt-malátakivonat folyékony táptalajon protoplaszt sejteket és konidiumot sem képzett, szexualitást nem mutatott. A kezelés során kapott legtöbb GS-t termelő törzset használtuk fermentációra. Kitermelés: 78%. 4. példa A táptalajból izolált Fusarium moniliforme G törzs (mutagénnel nem kezelt, eredeti vonal) malátakivönat-fcukaricaliszt-agiar tenyészetéből kcmidium szuszpenziót készítettünk. Lemézöntéses meghatározással meghatároztuk a szuszpenzió élőcsíra számát (1,95 106 csíra/ml). A szuszpenziót 1 ml-kint steril körülmények között leampulláztuk, majd az ampullába zárt szuszpenziót 1 órán át vízfürdőn 75 C°-on tartottuk. Szobahőmérsékletre történt lehűtés után az ampullák tartalmát steril csapvízzel 1 milliószorosra hígítottuk, majd a hígításból terítéseket készítettünk kukoricaliszt-malátakivonat-agar táptalajra.. 8 napon át 28 C°-on végzett inkubáció után a túlélő telepeket a fentiekben leírt tömegszelekciós módszerrel megvizsgáltuk gibberellinsav termelésre. A kezelés során kapott, legtöbb GS-t termelő törzset használtuk fermentációra. Kitermelés: 72 %. KH2 P0 4 0,5 g Csapvíz 1000,0 ml pH: 5,0 NaN03 2,0 g KH2 POÍ 1,0 g KCl 0,5 g MgS04 0,5 g Fe2 (S0 4 ) 3 0,0001 Glükóz 20,0 g Csapvíz 1000 ml pH 5,0 . Sanchez-Marroquin -féle táptala Glükóz 20,0 g Kukorica lekvár 25,0 g NH4NO3 2,6 g 10 15 20 25 30 35 40 5.példa Összehasonlító vizsgálatokat végeztünk oly 45 módon, hogy a kezeletlen Fusarium moniliforme G törzset különböző összetételű táptalajokon tenyésztettük. I. Krasszilnyikov féle táptalaj: 50 55 60 65 III. A Phylaxia Állami Oltóanyagtermelő Intézet által használt ipari táptalaj: Ammóniumtartarát 2,0 g Kristálycukor 10,0 g Szárított élesztő 0,31 Í Maláta 50,0 g Kukorica lekvár 2,0 g KH2 P0 4 0,5 g MgSO/, Fe++ , Mn++, Zn+ + Cu++, B+++ 10,0 yl ml IV. Az 1. példa szerinti táptalaj. A fermentációt 1 l-es rázólofnbikban, 150 ml táptalajon, 28 C° hőmérsékleten végeztük. Az eredményeket a II. táblázatban foglaltuk össze. II. táblázat Táptalaj Inkub. idő pH Maximális termelés (gibberelin(óra) kezdeti végső (g^Dereu v ' sav yl ml) I. 216 II. 168 III. 172 IV. 192 5,0 4,5 5,5 4,0 5,5 3,8 5,5 4,0 35 80 150 30D Amint az a táblázatból kiderült, a legjobb eredményt a IV. táptalajon kaptuk. A kísérletek megismétlésekor a gibberellinsav termelés mind a négy táptalaj esetében jelentősen ingadozott. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás gibberellinsav biztonságos termelésére az OKI-ban 1968. október 25-én 49. szám alatt letétbe helyezett Fusarium moniliforme törzzsel, azzal jellemezve, hogy a törzset egymást követően neutron-, röntgen- és u.V. besugárzásnak, kémiai mutagen kezelésnek és adott esetben hősokk-kezelésnek vetjük aTá oly módon, hogy a következő kezelési lépésbe mindig csak a termelő variánsokat visszük, vagy pedig egyedül hősokk kezelést alkalmazunk, majd a törzset 1—8% szénforrást, 1—7% nitrogénforrást tartalmazó táptalajon aerob körülmények között tenyésztjük, végül a táptalajból a gibberellinsavat adszorpcióval kinyerjük. 5
