157328. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 11 837 RP antibiotikum előállítására

157328 13 14 lizáljuk. Lehűtés után a táptalaj térfogata 120 liter és a pH-ja 6,90. Ezután beoltjuk a táptalajt Streptomyoas Venezuelas var. furvofurvescens DS 7103 törzsnek 200 ml rázott Eirlanmeyar-tamfaikban készült (kultúrájával. A tenyészetet Ikevarés ós steril levegővel való levezőztetiés közben 30 C°^an 28 óra hosszat szaporítjuk; ekkoir alkalmas a termelő tenyészet beoitásiára. A termelő tenyészetet 800 literes fermentarban fermentáljuk iá következő anyagokkal: kuíkaricaleikvár 20 kg keményítő • 7,5 kg szójaolaj 7,5 liter káliumhidrogán foszfát 1 kg mágnéziumiszulfát 1 kg kolbaltkllarid, kristály vizes 0,01 íkg vízzel kiegészítve 460 literre-A keverék pH-jának 2800 ml tömény nátronlúggal (d = 1,33) 7,15 érteikre való beállítása után még hozzáadunk 5 íkg kalciuimflaaírbaniátot. A 7,35 pH-jú táptalajt 122 C°-ois gőznek 40 percig tartó átbiuboirékoltatásával sterilizáljuk. Lehűtés után a táptalaj térfogata 490 liter és a pH-ja 7,05. Ezután beoltjuk a 170 literes íermentorban a fent leírt módom készült 50 liter oltóanyaggal. A tenyésztést 30 C°-on 06 óira hosszat végezzük, miközben percenként 2.85 fordulatú lapátos keverővel keverjük, és óránként 05 m3 steril levegő bevezetésével levegőztetjük. Ekkor •a közeg pH-ja 8,55, és ia fermentlé térfogata 420 liter. A jelenlevő antibiotikum mennyisége 1820 E/ml. I. pé Az 1- példában leírt módom .készült 420 liter Stireptamyces venezüelae var. fülviofurvesceins DS 7 103 fermemtlének a pH-jiát egy keverővel ellátott tartályban faszfoirsavval 4 éirtékire állítjuk be. Félórai keverés után 20 kg Olarcel DIC szűréssegítőt adunk a fermentléhez, a szuszpenziót szűriősajtón átszűrjük. Szűrés után a miicélium-lepényt a szűrőn 200 liter vízzel mossuk. A szűredéket és a vele egyesített mosóvizet (összes térfogatuk 550 liter) kiontjuk. A 113 kg súlyú nedves lepényt keverővel ellátott tartályban 250 liter metanol és ;50 liter víz elegyében sauszpenidáljuík. A szuszpenzió pH-ját nátron! úggal (d = 11,33) 7 értékre állítjuk be, és a keverést 1 ára hosszat folytatjuk. Ezután a szuszpenziót szurosiajton átszűrjük, és a szűrőlepényt 30'% vizet tartalmazó 50 liter metanollal möisisuk. A 96 kg súlyú kilúgozott mieéliuniot elvetjük. A micéliuni metanolos kivonatát (összes térfogata 360 liter) 40 torr nyomás alatt folytonos keringtetés közben 6 liter térfogatra koncentráljuk. A koinoentrátiumhoz 30 liter etanolt és 40 liter acetont adva a termeiket kicsapjuk. A csapadékot centrifugáljuk, mossuk, és vákuumban megszárítjuk. így 780 g terméket kapunk 515 E/mg hatóanyagtaírtaloni'mal. 3. példa: 5 A 2. példában leírt módom készült, 515 E/mg hatóanyagtartalmú 780 g antibiotikumot feloldunk 10 liter desztillált vízben. Az oldatot átszűrjük agy kovai öldrétegein, 10 majd 'ráboasátjujk egy 6 liter klárfáziisú Dowex 1X2 gyantát tartalmazó 9 cm belső átmérőjű oszlopra. Az oszlopot sorban a következő folyadékokkal mossuk: 15 desztillált vízzel iaz elfolyás elszántélenedéséig 6 liter 10:90 tf^arámyú hangyasav-víz elisgygyel - 20 liter 10:10:80 tf-ianányú hamgyasav-víz-20 -metanol elegigyal 20 liter 80 :i20 tf-arányú metanol-víz elegygyel 20 liter Ezután az íantilhioitikumiat eluáljuk 10 g/liter 25 káiiumkloiridot tartalmazó 80:20 iairámyú metanol-víz eleggyel-10 literes frakciókat fogunk fel, a legaktívabb frakciókat (2—6.) egyesítjük, és csökkentett nyoimás alatt 40 C°-nál alacsonyabb hő-30 mérsékletem 3 literre koncentráljuk. A ikonoeintrátuimot a sóik és különféle szenyínyezéseik eltávolítására 48 iára hosszat 3 ízben megújítjuk, majd liofilizáljuk. Ily módon 27 g tiszta antibiotikumot kapunk káliumsója alakjában 12 300 E/mg hatóanyagtairtialomimal és a következő fizáikai-lkérniai tulajidoinságolklkal: külső megjelenés: világos vörösessárga, víz-40 ben könnyen oldódó lamiorf por, ultraibolya színkép: 50 mg/liter koncentrációjú vizes oldatban meghatározva az adszorpció 35 50 255 inm-mél maximális (E i', = 106,5). 45 Elemi összetétele: C 46,9%, H 6,65%, O 36,9% (a különbségből) N 4,S%, P 2,1%, K 2,95%. 4. példa: Az 1. példában leírt módon oltóanyagát készítünk egy 170 literes fermentoirban. A sterilizálás után 7,0 pH-jú táptalajt beoltjuk Streptomyoes venezüelae var. fulvofurvescens DS 55 11 355 törzs 200 ml iázott Erlenmeyer-lombiiíkblan készült kultúrájával. A ítenyészetet 30 óra hosszat (az 1. példában leírt keveirésii, levegőztetiési és hőmérsékleti viszonoyok között szaporítjuk. 60 A termelő tenyészetet az 1. példában leírt 500 liter táptalajjal töltött 800 literes fenmentoirbain fermentáljuk. Ezt a táptalajt, amelynek a pH-ja sterilizálás után 6,90, beoltjuk a 170 65 literes ferm/entorbam fent leírt módon készült