157076. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására
157076 7 8 1. példa: 5. H—Tyr—Ser—Nie—OCH3 1. H-Nle-OCH3 18,4 g L-norleucint 57 ml metanolban szuszpendálunk és keverés közben —15 C°-on 30 perc alatt 11 ml tionilkloridot adunk hozzá. Az elegyet még további 30 percen át —15 C°-on, majd 90 percen át 0 C°-on és 90 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután 3 órán át 40 C°on állni hagyjuk, majd az oldatot 35 C°-on szárazra pároljuk és a maradékot aceton-hexán (2:1) elegyből átkristályosítjuk. Op.: 140—141 C°. A hidroklorid 18,1 g-ját 20 ml vízben feloldjuk, 200 ml étert rétegezünk rá és 0 C°-on 40 ml hideg telített káliumkarbonát-oldattal összekeverjük. A vizes fázist éterrel többször extraháljuk, az éteres oldatokat egyesítjük, nátriumszulfáton szárítjuk és nagy vákuumban 0 C°-on bepároljuk. A szabad észtert tiszta olaj alakjában kapjuk. 2. BOC—Ser—Nie—OCH3 22,3 g BOC-L-szerin-hidrát 270 ml acetonitrillel készített oldatát összekeverjük 14,3 g L-norleucinmetilészter 65 ml acetonitrillel készített oldatával. Az elegyet —5 C°-ra hűtjük, 22,7 g, 35 ml acetonitrilben oldott diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá, még egy órán keresztül —5 C°-on, majd éjszakán át 0 C°-on keverjük, a diciklohexilkarbamidot eltávolítjuk és az oldatot 35 C°-on bepároljuk. A maradékot ecetészterben felvesszük, az oldatot n-sósavval, nnátriumhidrogénkarbonáttal és telített nátriumklorid-oldattal mossuk és bepároljuk. A kristályos dipeptid-észter 69—71 C°-on olvad. 3. H—Ser—Nie—OCHo 28,0 g BOC—Ser—Nie—OCH.,-t 320 ml 90%os trifluorecetsavban feloldunk és 2 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután az oldatot fél térfogatra bepároljuk, majd 500 ml éterrel összekeverjük, ekkor a trifluoracetát kikristályosodik. Ezt (24,2 g) 35 ml vízben feloldjuk, 700 ml kloroformot alárétegezünk és keverés közben 0 C°-on 210 ml telített káliumkarbonát-oldattal elegyítjük. A kloroformos fázisból 16,1 g kristályos dipeptid-észtert nyerünk ki 84—85 C° olvadásponttal. 4. BOC—Tyr—Ser—Nie—OCH3 19,6 g BOC—Tyr—OH-t és 16,1 g H—Ser— —Nie—OCH3-at 350 ml acetonitril és 17,5 ml dimetilformamid elegyében oldunk, —5 C°-on 15.9 g diciklohexilkarbodiimid 175 ml acetonitrillel készített oldatával elegyítjük és 1 órán át •—5 C°-on. majd éjszakán át 0 C°-on keverjük. Ezután eltávolítjuk a diciklohexilkarbamidot, a terméket a fent megadott módon mossuk és az oldatot beDároljuk. A védett tripeptidészter átkristályosítás után 143—145 C°-on olvad. 27,3 g védett tripeptidésztert 82,5 ml metanolos n sósavban oldunk, 2 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 1,5 1 éterrel összekeverjük. A szabad tripeptidészter hidrokloridját kapjuk, amely átkristályosítás után 218— 220 C°-on (bomlás) olvad. A hidroklorid 14,2 gját 20 ml vízben feloldjuk, 400 ml kloroformot alárétegezünk és 0 C°-on 100 ml telített káliumkarbonát-oldattal elegyítjük. A szabad bázis átkristályosítás után 84—86 C°-on olvad. 6. BOC—D—Ser—Tyr—Ser—Nie—OCH3 13,4 g H—Tyr—Ser—Nie—OGHa-t 250 ml acetonitrilben feloldunk és 15 ml dimetilformamid hozzáadása után 7,35 g BOC—D—szerinnel keverjük össze. —5 C°-on 7,45 g diciklohexilkarbodiimid 30 ml acetonitrillel készített oldatát adjuk hozzá, majd 1 órán keresztül —5 C°on és éjszakán át 0 C°-on keverjük. A diciklohexilkarbamidot eltávolítjuk és az oldatot bepároljuk. A védett tetrapeptidészter átkristályosítás után 149—151 C°-on (bomlás) olvad. 7. BOC—D—Ser—Tyr—Ser—Nie—NH—NH2 11,65 g tetrapeptidésztert 50 ml metanolban oldunk, az oldathoz 4,8 ml hidrazinhidrátot adunk és az elegyet 24 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután 50 ml vizet adunk hozzá és addig keverjük, amíg a kocsonyás termék teljesen át nem kristályosodik. Op.: 205— 207 C°. 8. BOC—D—Ser—Tyr—Ser—Nie— —Glu(OtBu)—His—Phe—Arg—Try— —Gly—OH 8,75 g BOC—D—Ser—Tyr—Ser—Nie—NH— —NH2-t 75 ml dimetilformamidban oldunk és keverés közben —15 C°-on 20 ml 2 n klórhidrogén jégecetes oldatával elegyítjük. 1,65 g tercbutimitrit hozzáadása után az oldatot 10 percen át — 15 C°-on keverjük, majd 5,5 ml trietilaminnal keverjük össze. A BOC-tetrapeptidazid így kapott oldatát cseppenkint 10 g H—Glu (OtBu)—His—Phe—Arg—Try—Gly—OH 225 ml dimetilformamiddal és 12 ml vízzel készített. —10 C°-ra hűtött oldatához adjuk. Ä reakcióelegyet 20 órán át 0 C°-on keverjük, majd 900 ml,vízzel elegyítjük. Az amorf dekapeptidet leszi vatjuk és dimetilformamid-víz (1:5) eleggyel és acetonitrillel mossuk. Vizes acetonitrillel való lecsapás és légszárazzá történő szárítás után 12,9 g tiszta, védett dekapeptid-tetrahidrátot kapunk 215-218 C° (bomlás) olvadásponttal. [a]20D : 18° ± 2° (c = 0,5 piridin-víz 1:1, elegyében). A vegyület vékonyrétegkromatogrammon (szilikagélen) egységes, R/ (52) = 0,3. 10 15 20 25 S0 35 40 45 50 55 60 d
