157010. lajstromszámú szabadalom • Eljárás albumin kinyerésére vérplazmából vagy vérszérumból

157010 6 rés közben 640 ml 40%-os triklórecetsavat adunk szobahőmérsékleten. A képződött fehérjecsapadékból az albumint 1% monoklórecetsavat tartalmazó 10 liter oldószereleggyel vonjuk ki, amely kloroformot, etilalkoholt és vizet 4 : 86 :10 arányban tartalmaz. Az oldatlan globulinokat elkülönítjük, majd -az' albumin tartalmú savanyú oldatot 1 súly/térf.% aktív szénnel derítjük és szilikát alapanyagú diatomaföldön, Celite 535-tel készített szűrőpadon- szűrjük. A tiszta és enyhén sárgászöld oldatból 12%-os, ammóniumhidroxid oldat hozzáadásával pH 5.20-nál választjuk le az albumint; elkülönítése után 800 ml deszt. vízben oldjuk, majd deszt. vízzel szemben dializáljuk, végül Seitz-szűrés után liofilizáljuk. Hozam 13,0 g albumin/liter plazma, tisztasága elektroforetikus vizsgálat alapján 98%, hamutartalma 0,5%. A kiindulási plazmaalbuminra vonatkoztatott kitermelés 40%-os. 3. példa 2 liter sertés oxalát-plazmához előbb 200 ml 15%-os diklórecetsavat, majd 1100 ml 10%-os triklórecetsavat adunk 5 C°-on. A plazmafehérjék elkülönítését és ezt követően az albumin oldását a 2. példa szerinti módon végezzük. Az elkülönített, majd aktív szénnel és Celite 535-tel derített oldatból az albumint tömény ammóniumhidroxid cseppenkénti hozzáadásával pH 6,0-on csapjuk ki; a kicsapott albumint deszt. vízzel oldjuk és dialízis után fagyasztott állapotból szárítjuk. A hozam: 8,0 g albumin/liter sertésplazma, tisztasága elektroforetikus vizsgálat alapján 98%, hamutartalma 0,4%. A kiindulási plazmaalbuminra vonatkoztatott kitermelés 40%. 4. példa 2 liter lószérumból a fehérjéket 1% monoklórecetsav jelenlétében 3% triklórecetsav végkoncentrációval csapjuk ki. A fehérjecsapadék elkülönítését, az albumin kioldását, oldatának derítését és az izoelektromos kicsapását a 2. példa szerinti módon végezzük. A dializált albumin-oldatot azbeszt alapú Seitz EK szűrőn szűrjük, majd fagyasztott állapotból szárítjuk. A hozam: 12,6 g albumin/liter lószérum, tisztasága elektroforetikus vizsgálat alapján 98%, hamutartalma 0,3%. A kiindulási lószérumra vonatkoztatott kitermelés 50%-os. 5. példa 3,3 liter hígított marha oxalát-plazmához, amelyből a prothrombint és fibrinogént előzetesen adszorpciós úton, ill. kicsapással már eltávolítottuk, 150 ml 40%-os monokjórecetsavat, majd 260 ml 40%-os triklórecetsavat adunk szobahőmérsékleten, lassú és állandó keverés közben. A keletkezett csapadékot elkülönítjük, majd az albumint 4 liter, 2 súly/térfogat% monoklórecetsavat tartalmazó oldószereleggyel oldjuk ki belőle, amelyben a kloroform : etilalkohol : víz=ú : 90 : 9. A továbbiakban a 2. példa szerinti-módon járunk el. Hozam: 11 g albumin/liter plazma, tisztasága elektroforetikus vizsgálat alapján 98%, hamutartalma 0,2%. A kiindulási 5 plazmára vonatkoztatott kitermelés 40%-os. .6. példa 10 1,7 liter emberi plazmához 85 ml 40%-os monoklórecetsavat, majd 275 ml 40%-os triklórecetsavat adunk. A keletkező csapadékot elkülönítjük, majd belőle az albumint 3,5 liter, 1 súly/térfogat% diklórecetsavat tartalmazó oldószer-15 eleggyel vonjuk ki, amelyben a kloroform : etilalkohol : víz = 2 : 88 :10. Az elkülönített albumin oldatból az albumint a 2. példa szerinti módon izoláljuk és szárítjuk. Hozam: 17,6 g albumin/liter plazma, tisztasága lelektroforetikus 20 vizsgálat alapján 98%-os, hamutartalma 0,2%. A kiindulási plazmára vonatkoztatott kitermelés 25 40 7. példa 5 liter oxalates marhaplazmából a fehérjéket a 2. példa szerinti módon csapjuk ki. A fehérjecsapadékból az albumint 1% monoklórecetsavat tartalmazó oldószereleggyel vonjuk ki, amely 30 petrolétert, aeetont és vizet 1 : 84 :15 arányban tartalmaz. Az albumin izolálását és szárítását a továbbiakban a 2. példa szerinti módon végezzük. Hozam: 15,0 g albumin/liter plazma, tisztasága elektroforetikus vizsgálat alapján 98%, ha-35 mutartalma 0,2%. A kiindulási plazmaalbuminra vonatkoztatott kitermelés 45%-os. 8. példa 10 liter oxalates marhaplazmából a fehérjéket 0 C° hőmérsékleten a 2. példa szerinti módon csapjuk ki. Az albuminnak a fehérjecsapadékból történő kioldását, elkülönítését, izolálását 45 egyaránt 0 C°-on, a 2. példában megadott körülmények között végezzük. Hozam: 16,0 g albumin/liter plazma, tisztasága elektroforetikus vizsgálat alapján 98%, hamutartalma 0,2%. A kiindulási plazmára- vonatkoztatott kitermelés 50 55%-os. Szabadalmi igénypontok 55 1. Eljárás albumin kinyerésére vérplazmából vagy vérszérumból, azzal jellemezve, hogy a plazma- vagy. szérumfehérjéket mono- és/vagy diklórecetsav jelenlétében a helyettesített szerves savak csoportjába tartozó fehérje kicsapódó szerrel kicsapjuk és elkülönítjük, a fehérje csapadékból az albumint mono- és/vagy diklórecetsavat, továbbá apoláris és poláris szerves oldószert és vizet tartalmazó oldószereleggyel kioldjuk, majd az így kapott oldatból az albumint €5 izoelektromos pontján kicsapjuk és izoláljuk. 3