156901. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyengített rubella-vírus előállítására

ííp 156901 használt rubella-vírussal beoltjuk. Minden egyes palacktenyészethez 100 ml 199-es számú közeget adunk, amely 10%-nyi mennyiségben'. valamelyalkalmas, a vírus, fertőző képességét stabilizáló szert tartalmaz. A palackokat 30—34 C° közötti hőmérsékleten inkubáljuk. A tenyésztést fenntartó közeghez 50 mcg/ml koncentrációban Neomycint adagolunk. Meghatározott időközökben az összegyűlt tenyészetet kinyerjük és a palacktenyészeteket a fent említett stabilizálószert tartalmazó friss fenntartó közeggel ismét megtöltjük. Minden egyes összegyűjtött tenyészetet fertőzőképesség szempontjából gri vet-majomvese szövettenyészeten' titráljuk. A tenyészeteket aszeptikus körülmények között steril tartályokba töltjük be, mikrobás sterilitási vizsgálatokra mintákat veszünk és a megmaradt anyagot száraiz-jégialkoholos fürdőben kifagyasztjuk. A vírust tartalmazó folyadékot elektromos hűtőegységben: —70 C°-on tároljuk, mielőtt a megfelelő tenyészetet vagy tenyészeteket a vakcina készítéséhez kiválasztanánk. A kiválasztott tenyészetet vagy tenyészeteket ezután fertőzőképesség szempontjából titrálásnak vetjük alá. A kiválasztott anyagot a hűtőberendezésből kivesszük és megolvasztjuk. Egy mintát ellenőrzési és biztonsági vizsgálatokra félreteszünk. A megmaradt folyadékhoz még stabilizálószert adagolunk, majd azt derítjük és újabb mintát majmokon végzett biztonsági vizsgálathoz ismét kiveszünk. A folyadékot ezután ampullákba töltjük le, és szárítjuk. A szárítási művelet után az ampullákat lefedjük és leforrasztjuk, majd felhasználás előtt a vakcinát sterilvízzel hígítjuk. A vakcina hatékonyságát a szövettenyészetekre kifejtett fertőző jellege alapján állapítjuk meg. 2. példa: Az 1. példa szerinti eljárást megismételjük azzal az eltéréssel, hogy a rubella vírust 35—38 C° között és 36 C°-hoz közeli hőmérsékleten inkubáljuk. A csirkeembrió-szövettenyészeten szaporított vírus: további gyengítése céljából 10-nél több egymásután következő szaporítási sorozatszakaszt állíthatunk be. Az egyes sorozat szaporítási szakaszok történhetnek gri vet-majom vese szövettenyészeten vagy embriót tartalmazó tyúktojásokon történő inkubációval. Ezt a lehetőséget a következő példákon mutatjuk be, amelyekben az egyes jelölések az alábbiakat jelentik: GMK = grivet-majomvesetenyészet EAM = embriót tartalmazó tyúktojásteny észét CEF = csirkeembrió-szövettenyészet DEF = kacsaembrió-szövettenyészet 3. példa: 2 GMK — 1 EAM — 9 GMK — 5 DEF (35— 38 C°) — 26 DEF (30—34 C°) — CEF (30—34 5 CT). 4. példa: 5 GMK — CEF (30—34 C°; 35—38 C°). 10 5. példa: 77 GMK — 3 DEF — CEF (30—34 C°). 15 6. példa: Klinikai anyag (toroktampon) — DEF—CEF (30—34 C°). 20 25 S0 35 40 45 50 55 7. példa: 5 GMK — 1 CEF — 2 DEF — CEF (30—34 C°). A találmány szerinti gyengített vírus előállítási eljárás szemléltetésére szolgáló példákban csirkeembrió-szövettenyészeten 10 vagy ennél több szakaszban végzett szaporítást vázoltunk. A több szakaszban végzett szaporításnak az a célja, hogy a vírus gyengítése nagyobb biztonsággal végbemenjen. Belátható azonban az, hogy kevesebb szakaszban végzett szaporítás is ennek a célnak megfelelhet. Így a találmány oltalmi körébe tartozik az olyan eljárás is, amelynek során csirkeeembrió-szövettenyászeten mindössze egyszakaszban inkubálunk. A kívánt tulajdonsággal rendelkező vírus így is 'előállítható és embergyógyászatban alkalmazva rubella ellenanyagreakciót vált ki és a megbetegedés egyébként komoly klinikai tüneteit enyhíti. Ha a vírus szaporítását több egymást követő szakaszban végezzük az első tenyésztés után, akkor természetesen várható az, hogy a vírus gyengítése nagyobb mértékben végbemagy. Szabadalmi igénypont: Eljárás gyengített élő rubella-vírus előállítására, amely embergyógyászatban ellenanyag reak. ciót vált ki a vírus ellen, anélkül, hogy klinikai tünteket okozna, azzal jellemezve, hogy klinikai anyagból izolált élő vírust felvagdalt és végtagjaitól megfosztott, tripszinnel feltárt 9—-11 napos csirkeembrió-szövettenyészetet tartalmazó szintetikus tény észközegben legalább 10 szakaszban 301

—38 C° közötti hőmérsékleten szaporítunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7007440. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 3