156667. lajstromszámú szabadalom • Eljárás redukált nitkotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát-tetranátriumsó előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1968. I. 18. (AE—244) Német Demokratikus Köztársaság-beli elsőbbsége: 1967. IV. 05. (WP 12 p/123 818) Közzététel napja: 1969. VI. 28. Megjelent: 1970. VI. 30. 156667 •*\ tvMm ^ I Szabadalmi osztály: 6 a 14—23 Nemzetközi -osztály: C 12 c, k Decimal osztályozás: Feltalálók: Dr. Rose Günter, Dr. Nürnberger Hansdietar, Drezda, Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: VEB Arzneiimittehverk Dresden, Drezda, Német Demokratikus Köztársaság Eljárás redukált nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát-tetranátriumsó előállítására A találmány redukált nikotinamid-adenin-dinukleotidfoszfát (NADPH) tetranátriumsó alakjában történő előállítására szolgáló eljárásra vb- ' natkozik. Az NADPH a hidrogénezett piridinnukleotidök csoportjához tartozik. Jellemző 5 fényabszorpciója 340 m.u-nál alkalmas az enzimes szubsztrátikoncentráció mérésére. Ez a Warburg által „optikai vizsgálat"-ként bevezetett módszer a biokémiai és klinikai laboratóriumokban egyre nagyobb jelentőségre tesz szert. Míg 10 a niko tinamid-adenin-dinukleotid-foszf át (NADP) enzimes reakciójára több módszer ismeretes, a tetranátriumsó előállítására az irodalomban eljárások nem találhatók. Az NADPH előállítására leggyakrabban alkal- 15 mázott eljárások egyike az NADP glükóz-6--foszfát-dehidroigenáz (G-16-PDH) enzimmel katalizált reakciója glükőz-6-foszfáttal (G-6-P) NADPH-vá és 6-foszfoglükonsawá (6-PG) (Colowick F. P. és Kaplan N. O.: Methods in En- 20 zymology, I. kötet, Acad. Press, New York 19.55, 323. o.) a G-^6—P-f-NADP q=i 6—PG+NADPH+H+ Mg2+

25 egyenlet szerint. A keletkező NADPH-nak a megmaradó reakciópartnerektől és különféle lebontási termékektől való tisztítására különböző módszereket 30 használnak, mint a papír- és vékonyrétegkromatográfiát, valamint az oszlopkromatográífiát cellulózcserélőn, különösen DEAE^cellulózon történő grádiensBlúcióval. {J. biol. Chem. 236, 2314 (1961.)]. Mindezekben az eljárásokban azonban közös, hogy csupán a tisztított koenzim oldatát kapják anélkül, hogy a vegyületet szilárd alakban, különösen mint tetranátriumsót, izolálnák. A találmány szerint megállapítottuk, hogy az NADPH-^Na4

előállítására DEAE-cellulózon való kromatográfiás tisztítás segítségével különösen gazdaságos eljárás az, hogy az elúciót a liofilizálásnál illó pufferrendszerrel nátriumbromid vagy nátriumjodid lineárisan növekvő gradiensével +4 C°-on végezzük. A találmány szerinti eljárás különösen kedvező eredményeket ad, ha illékony puiflferként 8 pH alatti, előnyösen 7,6—7,8 pH-jú etiléndiamin-ecetsav rendszert, eluensként nátriumbromidot (NaBr) használunk. A találmány szerinti eljárás alkalmazásának nagy előnye az, hogy a puiferanyagokat már a liofilizálásnál eltávolíthatjuk és a tisztított NAPDH—Na4

-ot a sógrádienstől etanollal való mosással megszabadíthatjuk. így lehetséges, hogy a találmány szerinti eljárással az NAPDH—ÍNa4

not mint enyhén sárga színű, vízben jól oldódó port kapjuk. Nagyvákuumban P2O5 felett szobahőmérsékleten vég-156667