156650. lajstromszámú szabadalom • Eljárás optikailag aktív antipodok előállítására

156650 10 Miként bevezetőben már említettük, a találmány szerinti eljárás nem korlátozódik csupán hatékony szteroid anyagok, ill. azok értékes közbenső termékeinek totálszintézissel való előállítására. Így a 'találmány szerinti eljárással elő lehet állítani például aminosavakat és atropint is. A megfelelő reakciókat a csatolt rajz szerinti 2. és 3. rea'kcióséma mutatja be. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. Ellenkező megjegyzés hiányában a „hidrogénkarbonát" kifejezés a kiviteli példákban mindig nátriumhidrogénkarbonátra vonatkozik. 1. példa: 3-Metoxi-a(14)-szeko-l,3,i5(10),9(ll)-ösztratetraén44aK>l-!17-om •(13/?-Hmetil-14a-OH^SM1

és 13

a

-metil-W'^QH-SMj) előállítása gombákkal végzett fermentáció útján a) 3-Metoxi-l

8i(li4)-szeko-4,3,5(10),S'(ll)-ösztratetraén^l4,17-dion (SM) redukálása Aspergillus ochraceusszal (CBS Dahme) ((Fermentálás gombatörzsekkel rázóloimbikban) 2 literes Erlenmeyer-lombikba 500 ml alábbi összetételű tápoldatot teszünk: 3 % glukóz 1 % kukoricalekvár 0J2 % NaN03 0,2 % K2

BP0

4 0,1 % KH2

P0

4 0,05 % MgS04 0,05 % KCl 0,002 % FeS04 majd fél órán át 120 C°-on végzett hevítéssel a lombik tartalmát sterilizáljuk, és lehűtés után beoltjuk Aspergillus ochraceus (CBS) olyan szuszpenziójával, amelyet úgy nyertünk, . hogy ferde agar-tenyészetet fiziológiai konyhasó-oldattal lemostunk. Az előkulfcúrát két napon át 30 C° hőmérsékleten rázatjuk 145 fordulat/pere sebességgel, majd a lombik tartalmát 50 ml-enként átoltjuk mindegyik esetben 450 ml azonos tápoldattal 10 darab 2-literes fermentációs lombikba. A lombikokat 16 órán át 30 C°-on rázatjuk, steril körülmények között mindegyik lombikhoz hozáadunk 5 ml 2%-os etanolos SM-oldatot, és a fermentálást további 24 órán át folytatjuk. A fermentáció lefolyását vékonyréteg-kromatográfia segítségével követjük. Éhhez Stahl-féle kovasavgéles lemezekre felvisszük a fermentációs próbák metil-izobutil-ketomos extraktumait, a lemezeket 15 cm-es ifuttatási felületen előhívjuk 9 :2 arányú kloroform-aoeton rendszerben, befecskendezzük 1 ml tömény kénsavbői és 20 ml 95%-os etanolból álló reagenssel, 10 percen át szárítjuk 140 C°-on, és hosszú-hullámú ultraibolya fénnyel kezeljük. SM Rp 0,92; színeződés: vörösessárga. ISß-Metil-Ha-OH-SMi és 17a-OH-SMj. Rp 0,72; színeződés vörösessárga. 13^-Metil-14!/

g-OH-SM

1

és 17i5-OH-SM

x S RF

0,I6Í3;

színeződés: zöidessárga. Az egyesített fermentációs tételeket kétszer 2.500 ml metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, és az extraktumot 45 C° fürdőhőmérsékleten vá-W kuumban kb. 5 ml-re betöményítjük. A koncentrátumot preparatív vékonyréteg-kromatográfiával tisztítjuk, abszoirbensként GF254

jelű kovasavgélt és ffuttatószerként 9 : 2 arányú benzol-ecetsav-elegyet használva, 15 A rövid-taHámhosszú ultraibolya fényben látható fő zónát (fcb. 0,4-es R^-értékikel) elkülönítjük, 100 ml metilén-kloriddal szobahőmérsékleten eluáljuk, az eluátumot 25 C° fürdőhőmérsékleten betöményítjük, és a maradékot 10 rész 20 diizoprapiléterből átkristályosítjuk. Ilyen módon l!3ß-metil-14o^OH-SMi-et kapunk az alábbi tulajdonságokkal: olvadáspont 101/102 —103,5 C°; a20D

=+47,8° (dioxán, e = 1); «264 = 20 900. 25 b) SM redukciója Aspergillus niger-rel (ATCC 9142). Az la példában leírt kísérleti feltételekkel azonos körülmények között Aspergillus nigerrel (ATCC 9142) végzett fermentáció útján i0 13^-metil-14a-OH-SMi-et kapunk. c) SM redukciója Rhizopus nigricans-szal (ATCC 6227b). Az la példában leírttal azonos kísérleti körülmények között a (fermentációt Rhizopus nigricans-szal '(ATCC 6227b) végezve, 13^Hmetil-14oc-OH-iSMi-et kaphatunk. d) SM redukciója Penieillium notatum-mai ,(NRRL 2284). Az la példában leírttal azonos' kísérleti körülmények között SM-ből Penieillium notatum-mal (NRRL 1982) végzett fermentáció útján 13,/J-metil-lía-OH-SM^et állíthatunk elő. 45 2. példa: 'lS/J-Metil-láa-OH^SM! előállítása élesztővel végzett 'fermentálás útján a) SM redukálása Saccharomyces cerevisiae-50 vei (NRRL Y—12250). (Fermentálás élesztővel rázólombikban). •5% glukózt és 2% fcukoricalekvárt tartalmazó 500 ml tápoldatot töltünk 2-literes Erlenmeyerlombikba. A lombikot sterilizáljuk,' majd beolt-55 juk Saccharomyces cerevisiae :('NRRL Y—2250) olyan szuszpenziójával, amelyet úgy kaptunk, hogy ferde agar kultúrát fiziológiai konyhasóoldattal lemostunk. Az előkultúrát 30 C° hőmérsékleten egy napon át rázatjuk 145 fordulat/ 60 perc sebességgel. A kultúrát ml-ehként átvisz- ' szűk 4 darab 2-literes fermentációs lombikba, 450—'450 ml azonos tápoldattal együtt, majd a lombikokat 6 órán át 30' C°-on rázatjuk, a lombikokhoz hozzáadunk 5—5" ml 2%-os etanolos 65 SM-oldatot, és további 20 órán át fermentáljuk. 5