156544. lajstromszámú szabadalom • Eljárás influenza-vakcina előállítására

156544 5 6 lel állapítjuk meg embriós tyúktojás allantoiszán. A pirogénmentességet a szokásos módon, nyúlba való intravénás befecskendezéssel ellenőrizzük. A hemagglutinin-szuszpenzió neuraminidázaktivitásának meghatározására a szuszpenziót szarvasmarha felső állcsont alatti nyálmirigyéből extrahált, előzőleg káliumbórhidriddel redukált mukciprotein-készítménnyel („nyálkasavkoncentrátum", gyártja a Nutritional Biochemicals Corporation, Cleveland, Amerikai Egyesült Államok) reagáltatjuk. A hemagglutinin-szuszpenzió enzimes reakciója ezzel a redukált mucinnal vízfürdőn 37 C°-on 2 óra alatt folyik le, és a felszabadult N-acetilneuraminsavat a Warren által leírt [J. Biol. Chem. 234, 1971 (1959)] tiobarbitursavas módszerrel határozzuk meg. A neuraminidáz-aktivitás egysége az a vírusmennyiség, amely ilyen körülmények között egy perc alatt 1 mikromól N-acetilneuraminsavat szabadít fel. Az A2/England/l/66 vírus esetében a hemagglutinin-szuszpenzió literenként 1—2 neuraminidáz-aktivitás egységet tartalmaz, a B/Roumanie/2/66 vírus esetében pedig 4—6 egységet. A bakteriológiailag steril, fertőző influenzavírustól és pirogénektől mentes szuszpenziót lezárt ampullákban 4 C°-on tartjuk el, 0,001% nátriummertiolát adalékkal. Az influenzavírus így kapott tisztított hemagglutinin-szuszpenzió jának az emulzióját az olaj adalékban a következőképpen készítjük: 30 ml ilyen szuszpenzióhoz hozzáadunk 27 ml szójaolajat, 3 ml manni'tololeátot és 0,5 ml polioxietilén-szorbitolmonooleátot (Tween 80) előzőleg sterilizált állapotban (a növényi olajokat cellulózészter-hártyán átszűrve sterilizáljuk, a mannitololeátot és a polioxietilén-szorbitolmonooleátot autoklávban). Ezt a keveréket olvadó jégben tartva aszeptikusán belemerítjük egy turbinás diszpergátor keverőjét, és azzal 5 percig kezeljük azt. Fehér, tejszínszerű, homogén és tartós emulziót kapunk; ezt 4 C°-on gumidugóval elzárt és fémsapkával ellátott üvegcsékben tartjuk el. Az így kapott egyszerű vakcina alkalmas embereknek való beadásra intramuszkulárisan 1 ml vagy szubkután 0,4 ml mennyiségben. 2. példa: Az 1. példában leírt módon eljárva, ugyanabból a törzsből kiindulva, de inaktiválószerként etilacetátot használva a kiindulási vírus tisztított agglutinin jának szuszpenzióját kapjuk. Ennek az ellenőrzését az 1. példában leírt módon végezzük. 3. példa: Embereknek intramuszkuláris vagy szubkután alkalmazásra szánt kombinált oltóanyagok előállítására a vakcinába bevinni kívánt különféle A, Ai, A2

és B típusú influenzavírus törzseket in ovo tenyésztjük, centrifugálással tisztítjuk, és etiléterrel vagy etilacetáttal kezeljük az 1. és 2. példában leírt módon. Az így kapott különféle egytípusú szuszpenziókat ezután oly módon keverjük, hogy végül minden jelenlévő antigén-típusból 100—500 HAE/ml koncentrációjú szuszpenziót kapjunk. A sterilitás, visszamaradt fertőző vírus mentesség, pirogén mentesség ellenőrzését, az emulgálást az olajos adalékban és az oltóanyag eltartását az 1. példában leírt módon végezzük. 4. példa: A sertések immunizálására szánt influenzavakcinát a következőképpen állítjuk elő. A sertés-influenzavírus A/Swine Sis törzsét in ovo tenyésztjük, és a vírust az 1. és 2. példában leírt módon tisztítjuk, azonban a tisztítást az első lépésre korlátozva (40 000 g-vel 60 percig centrifugálva). Az etiléteres kezelést az 1. példa szerint hajtjuk végre. A végső szuszpenzió koncentrációja 500—ilOOO HAE/ml vírus. A sterilitást és a visszamaradt fertőző vírus mentességet az 1. példa szerint ellenőrizzük. Az olaj adalékban való emulgálást szintén az 1. példa szerint végezzük, de a keverékhez diszpergálása előtt 5% átészterezett természetes trigliceridet adunk. [Pl. Labrafil M 1944 vagy Labrafil M 2735 (Gattefossé)]. Ezt az oltóanyagot intramuszkulárisan fecskendezzük be 5 ml-es adagokban. 5. példa: A lovak immunizálására szánt influenza-vakcina ugyanúgy készül, mint a 4. példában leírt, de a lovak influenzavírusának A/Equi/Prague és A/Equi/Miami törzséből vagy ezekkel rokon törzsekből kiindulva. Az oltóanyag bivalens, egy A/Equi/Prague és egy A/Equi/Miami törzset tartalmaz. Akárcsak a sertésvakcina esetében, az olaj adalék (növényi olaj + mannitololeát) 5% átészterezett természetes trigliceridet tartalmaz. Az oltóanyag intramuszkulárisan alkalmazható 5 ml-es adagokban. 6. példa: A pulykák immunizálására szánt influenzavakcinát a 4. és 5. példában leírt módon készítjük, de vírustörzsként a Turkey/England/63 (Langham) madár-influenzavírust használva. Az olajadalék, akárcsak a sertésvakcina és a lóvakcina esetében, 5% átészterezett természetes trigliceridet tartalmaz. Ezt az oltóanyagot intramuszkulárisan 1 ml mennyiségben vagy szubkután a szárnyba 0,2 ml mennyiségben alkalmazhatjuk. 7. példa: Embereknek az orron át való immunizálására szánt influenza-vakcina ugyanúgy készül, mint az 1. és 2. példában leírt, ami a vírusnak in ovo tenyésztését, töményítését, tisztítását, etiléterrel vagy etilacetáttal való kezelését és a jellemző emberi A, A-t, A2

és B típusú törzsek keverését illeti, egyszerű vagy kombinált oltóanyag készí-10 15 20 25 30 S5 40 45 50 55 60 3