156453. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nitrogén tartalmú anyag kinyerésére élesztőből
5 •• számottevő degradálása nélkül. Adott, esetben egy lipázt is alkalmazhatunk — egyidejűleg •. vagy utólag — a sejtfal további vagy gyorsabb gyengítésére, , A sejtfal; szénhidiráttartalmának degradálása- 5 , ra irányuló enzimes kezelés után a vizes fázis jelentős mennyiségű protoplazmafehérjét. fog oldott vagy szuszpendált állapotban tartalmazni. A kolloid szuszpendált fehérjét tartalmazó vizes fázist szétválaszthatjuk, például centrifuga- 10 lássál. . ' Ha úgy kívánjuk, ez. a, vizes fázis be is párolható a szilárd nitrogéntartalmú termék kinyerésére. '."'*; is"Az eljárás végrehajtását az alábbi példákon mutatjuk be, anélkül azonban, hogy a találmányt ezekre kívánnánk korlátozni. 1. példa: •"''-.. ,20 15 súly% gázolajon tenyésztett és nem-ionos felületaktív szerrel mosott Candida tropicalis^, tartalmazó 25 kg vizes élesztőkrémet 2 n náíronlúggal 7,6 pH-ra állítunk be, hozzáadunk 25 270 g kristályos dmátriumhidrogénfoszfátot (Na2HP04-12 H2O) és 5,34 g ' citromsäv-mono. hidrátot, a reakciókeveréket 70 C°-ra melegítjük, ezen a hőmérsékleten 15 g papaint és 15 g ciszteinhidrokloridot adunk hozzá, és 1 óra 30 hosszat 70 C°-on tartjuk. Ezután az anyagot eentrifugálással folyékony termeikre és maradékra választjuk szét, a maradékot 8 liter víz- ,: zel mossuk, és ismét centrifugáljuk. A kapott, 3,6 kg mikroorganizmusból és 15,5; liter fölya- 35 déklból álló (maradékot felvesszük, 15 liter desztillált vízben,; pH-ját 2 n sósavval 5-re állítjuk be, 138 g dinátriumihidrogénfoszfátot. (Na2HP04 • ; •12 H2O) é& 38,1 g citromsiav-monohidrátot adunk' hozzá, ezt az új keveréket 25 g celluláz 40 "• (B50 , SEAB^ gyártmány^ és 25 g lipáz B (Jlobm & -Haas gyártmány) jelenlétében 2 óra hosszat : ./.,._ 40 C°-on tartjuk. . Ezután a terméket centrifugáljuk, és a kapott folyékony terméket egyesítjük '.aar- előzőleg kapott folyékony termékkel, 45 majd, a keveréket porlasztó szárítással beszárítjuk.'2,25 kg száraz terméket kapunk 11 súly % nitrogéntartalommal. 2. példa: s0 15% szárazanyagot tartalmazó 10 kg vizes sütőélesztő .{Saccharomyces cerevísiae) szuszpenziót 2 n nátranlúggal 7,6 pH-ra állítunk be, hozzáadunk 3 liter 7,6 pH-jú puffer^oldatot 55 (390 ml 0,2 n nátriumhidrogénfoszfát-oldat és 2610 ml 0,2 n dinátriumhidrogénfoszfát-oldat), és a szuszpenziót 70 C°-jra melegítjük. Ezen a hőmérsékleten hozzáadunk 6 g ficint és. 3 g tiszteiin-hidroklaridot, 1 óra hosszat állni hagy- 60 juk, majd eentrifugálással folyékony termékre . és maradékra választjuk szét. A maradékot 3 liter desztillált vízzel mossuk, és - újra centrifugáljuk. A kapott maradékot felvesszük 3,3 liter vízben, és 2 n sósavval 5 pH-ra állítjuk 65 6 be. Ezt a szuszpenziót 3,3 liter foszfát-pufférT -citromsav keverékkel keverve 5 pH-ra állítjuk be. Ezután 15 g celluláz és 15 g lipáiz B jelenlétében^ óra hosszait 40 C°-on tartjuk. A terméket centrifugáljuk, és a kapott folyadékot hozzáadjuk az előbb eentrifugálással kapott folyékony termékekhez, majd a folyadék-keveréket porlasztó szárítással megszárítjuk. Mintegy 700 g száraz terméket kapunk 10 súly% nitrogénitartalommal. ." * Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás nitrogéntartalmú anyag kinyerésére élesztőből, azzal jellemezve, hqgy , egy élesztősejtekből álló vagy azokat tartalmazó anyagot fehérjebontó enzimmel kezelve az élesztőseitek falának fehérje összetevőjét degradáljuk,, majd a fehérjebontó enzimet — előnyösen az enzimet oldva tartalmazó folyékony fázis elválasztásával és/vagy az^élesztősejítefk 'mosásával — hatástalaníttjuk és/vágy eltávolítjuk, utána az "'"';. anyagot vagy annak egy részét a sejtfal szénhidrättartalmät megtámadó enzimmel kezelve a szénhidrátot degradáljuk, majd — adott eset- , ben a sejtfal'további megtámadására vagy felrepesztésére irányuló kémiai, célszerűen alkálilúgos, és/vagy fizikai kezelés után -f- a 'nitro- . gén tartalmú vegyületekét vízben oldott vagy '.:" szuszpendált alakban elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan, fe- ; hérjeíbontó enzimét alkalmazunk, • amely a sejt- • ' fal fehérje összetevőjében jelenlévő két meghatározott aminosav^ közötti kötést képes csak .ie'saaikitani:: . ~--; .•'••••"''"• 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy. a fehérjébontó enzim rpepszin, tripszin, broimelin, : \ ficiri vagy papain. ••: 4.. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosí- . „tási; módja, azzal jellemezve, shogy a papaint az. élesztő száraz sejtsúlya 0,2—0,3°/o^ánafc meg- : felelő meifhyiségben alkalmazzuk- '..•"'""' '5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a sejtfálbain lévő szénhidrátot megtámadó " > enzimként egy cellulázt és azzal együtt egy ^ *: zsírbontó enzimet (lipázt) alkalmazunk. 6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti, eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, •' hogy az élesztő .egy szénforrásként egyenesláncú paraffinszénhidragéneket asszimilálni képes élesztőtörzs. 7. A 6. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az élesztő a Cryptoooecaceae családiba tartozik. 8. A 7. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az élesztő a 'Cryptococcoideae alcsaládba tartozik. 9. A 8. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja., azzal jellemezve, hogy az élesztő a Toirulopsis nembe tartozik. 1Ó. A 8: igénypont szerinti eljárás foganatosí-3
