156451. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipo-allergén hatású cefalosporin-származékok előállítására

3 156451 4 A 7-aminö-cefalosparánsavat C-cefalosporin savas hidrolízise útján állíthatjuk elő. Ha a C-cef alosporiht a savas hidrolízis előtt egy tercier* piridinnbázissal kezeljük, akkor • a 3-piridinium-metil-7-amino-decefalosporánsav belső sót kapjuk. Az ilyen származékok vagy magukban tisztíthatók, vagy már tisztított C-cefalosporinból állíthatók elő, vagy pedig aeilezhetjük a savat és az acilszármazékot tisztíthatjuk.; e tisztítási művelet magábafoglalja az említett nagymolekulasúlyú, antigén hatású anyagok eltávolítását. A nagymolekulasúlyú, erősen antigén hatású anyagok elsősorban fehérje-jellegű vagy poliszacharíd-jellegű anyagokból állnak, amelyekhez kovalens kötéssel kapcsolódnak a cefalosporinból származó csoportok. Ezek a csopor^ tok a fermentáció folyamán alakulnak ki a cefalosporinnak a közegben jelenlevő fehérjeés/vagy poliszacharid-jellegű anyagokkal való reakciója útján. A találmány tehát oly eljárás az (I) általános képletnek megfelelő hipo-^allergén cefalosporinok előállítására, amelynek során a fermentációs eljárással kapott cefalosporint annak előállítása során vagy ezt követően egy vagy több tisztítási műveletnek vetjük alá a legalább 1000 molekulasúlyú és a arfalosporin-íermékben inherens módon jelénlevő antigénanyagok eltávolítására. Ezek a műveletek előnyösen a molekulasúlykülönbségéken alapúinak, mint a molekuláris szűrőanyagok alkalmazása és a dialízis. Egy különösen előnyös eljárás oly molekuláris szűrőanyag alkalmazásán alapul, amely cukor fermentációja útján nyerhető oly mó^ dosítött dextrán, amelyben a lineáris dextránmakromolekulák . hídkötés ékkel kapcsolódnak egymáshoz és így ipolíszaűharid-láncokból álló háromdimenziós térhálós szerkezetet képeznek. Alkalmas anyag erre a célra a „Sephadex" kereskedelmi elnevezés alatt ismert termék is. A kereskedelmi forgalomban levő „Cephalo-i idine" készítménnyel — oly (I) képletű cefalosporin, amelyben R = 2-tienilmetil, A =-piridinium és M == anionos töltés — végzett kísérletek során kitűnt, hogy a termékben egy nagymolekulasúlyú frakció van jelen, amely reakcióba lép a passzív kután anafilaxiás próba során, a penicilloil-antitestak elleni antis.zérumma]; az ilyen kísérleteket az alábbi módon végeztük: Anti-penicilloil antitesteket készítettünk oly módon, hogy egy nyúlnak szubkután és intradermális úton egy megfelelő penicillin-protein konjugátumót adtunk be Freund^féle komplett adjuvánssal együtt. Megfelelő idő elteltével a nyulat véreztettük és a szérumot összegyűjtöttük. Az így kapott szérumból készített hígításokat azután egy tengerimalac bőrébe fecskendeztük intradermális úton. 18—24 óra múlvaa tengerimalacnak ' intravénás injekcióban beadtuk a feltételezett cefalosporin^specifikus antigént, 0,3 ml 5%-os „Pontamine sky blue" "oldattal együtt. Cefalosporin^specifikus antigén jelenléte esetén ez reakcióba lép a tengerimalac bőrében rögzített ideospecifikus antitesttel 5 és e reakció megnövekedet't kapilláris permeabilitást okoz, ami a kék színezék kilépését eredményezi. A reakció foka a fellépő . kék foltok átmérője alapján mérhető, figyelembe véve az éppen látható reakciót kiváltó legki*" sebb antitest-koncentrációt is. , .::, Az antigén mennyiségének mérése céljából előbb egy előzetes elkülönítést kell végezni, minthogy imaga a cefalosporin gátolja a reak" ció féllépését az állatban. Ezt az elkülönítést 15 oly módon végezzük,, hogy a cefalosporin-mín- tából 2 g-ot 5 ml vízben oldunk és az oídatot egy finomszemcséjű „Sephadex G25" molekuláris szűrővel töltött „LKB RöCyChrom" oszlopon vezetjük keresztül. Az antigén-anyagok 2" a cefalosporint megelőzik és a megfelelő frakciókat összegyűjtve, ezeket szenzibilizált tengerimalacnak beadott injekció útján vizsgálhatjuk. 25 A találmány szerint előállított hipo-allergén cefalospoirinnal, megfelelő gyógyszerészeti vivőanyaggal való kombinálás útján oly orális vagy parenterális beadásra alkalmas gyógyszerkészítmények állíthatók elő, amelyek az 30 embergyógyászatban baktériumos fertőzések leküzdésére alkalmazhatók, anafilaxiás reakciók fellépésének veszélye nélkül. Orális alkalmazás céljaira tablettázott vagy 35 kapszulázott készítményeket állíthatunk elő; a vivőanyag szilárd kötőanyagokat, hígítószeréket és egyéb ismert segédanyagokat tartalmazhat. Parenterális beadás céljaira injekciós oldatok készíthetők steril vízzel vagy más alkal-4" mas folyékony közeggel. A találmány szerinti, eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 45 1. példa: Egy 20 g „Cephaloridine" kereskedelmi elnevezésű készítményt tartalmazó vizes oldatot egy „Visking" dializálácsőbe helyeztünk és 5 nap-50 ig dializáltuk desztillált vízzel szemlben. A visszatartott anyagot, amely Cephaloridiine-től lényegileg mentes volt, bepárlás útján töményítettük, majd fagyasztva szárítottuk és így 66 mg szilárd terméket kaptunk (ennek nagy része va-55 lószínűleg a Cephaloridine maradékából vagy bomlástermékeiből állt).' E szilárd anyag 2 . ing-ját 0,5 ml vízben oldva azt találtuk, hogy az oldat passzív kutan anafilaxiás reakciót vált ki szenzibilizált tengerimalacon (a szenzibilizá-60 lás a fentebb leírt módon,' nyúlon termelt penicilloil-antitestek intradermális injekciójával történt). A penicilloil-^peeifikusságot az N-peni'cilloil-s-ammokäp'ronsawal való reakció gátlása alapján is ellenőriztük. A kapott eredmé-85 nyéket az alábbi I. táblázat tartalmazza: .2