156235. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
13 képzett oldatát adagoljuk. A reakciókeveréket 12 óra hosszat szobahőmérsékleten keverésben tartjuk a kivált űUtiklohexilkarbamidot leszűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. A szilárd habszerű maradékot kétszer etilacetát-ipetroléterelegyből átoldjuk, amikoris 16,02 g amorf tetrapeptidszánmazékot nyerünk. A termék szilifcagéllel végzett vékonyrétegű lemezeiken az alábbi R/-ártékeket mutatja: R/ (9 : 1) klorofor m-on etanol = 0,29 R/ (43 A) =0,68 4. H-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2 15,5 g védett tetrapeptidamidot 100 ml metanolban feloldunk és 1,5 g 10%-os palládiumos aktívszén jelenlétében légköri nyomáson telítésig hidrogénezünk. (A hidrqgénezés kb. 4 óra hosszat tart.) A katalizátort kiszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk, a maradékot 10 ml metanol és 120 ml etilacetát elegyében feloldjuk és a terméket 120 ml petroléter hozzáadásával kicsapjuk. A nyers terméket nagyvákuumban 40°-on szárítjuik, 11,9 g amorf por alakú terméket kapunk, amelynek vékonyrétegű kromatogramimja szilikagélen R/-értekéket mutatja : R/ (9 :1) kloroform-metanol = 0,08 R/ (43A) = 0,27 5. Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2 5,2,8 g Z-Val-OH és 3,07 ml trietilamin keveréket 50 ml vízmentes etilacetátban feloldunk, az oldatot —10°-ra lehűtjük és 4,67 ml izobutilklorkarbonát 5 ml etilacetátban képezett oldatát adjuk hozzá. Az elegyet 15 percig —10°-on keverésben tartjuk, majd kb. —-5°-on 11,87 g H-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2 10 ml dimetilformamidban képzett oldatát adjuk hozzá. A keveréket 30 percig 0°-on, majd 5 óra hoszszat szobahőmérsékleten keverésben tartjuk, ezután 100 ml vizet és 200 ml nnbutanolt adunk hozzá. A vizes fázis elválasztása után a szerves fázist egymást követően 10%-os borikősavoldattal (0°-on), telített nátriumhidrogénkarbonátoldattal és telített nátriuimszulfátoldat'tal mossuk, a mosott szerves fázist nátriumszulfát felett szárítjuk végül szárazra bepároljuk. A habszerű maradékot előtisztítás céljára egyszer metanol-etilaoetát-petroléter-elegyből, egyszer pedig metanol-acetonitril-elegyből átoldjuk, Így végeredményben 12,15 g amorf por alakú terméket kapunk, amelyet 9:3:4:4 arányú metanol-0,1 mólos amóniumacetátoldat-Moroform-széntetraklorid oldószerrendszeriben mindenkor 25—25 ml fázistérfogatokikal 250 fokozatban multiplikatív megosztásnak vetünk alá. A 81— 115 megosztási elemekből (rm ax = 91; K = 0,57) származó anyagot szárazra pároljuk és az ammóniumacetátot 45°-on nagyvákuumban elszublimáljuk. Összesen 7,94 g kromatográfiai szempontból tiszta védett pentapeptidet nyerünk, fehér, amorf por alalkjában. A termék vékony-14 rétegű kromiatografálás során szilikagélen a következő R/-értékeket mutatja: R/ (9:1) kloroform-metanol = 0,42 5 R/ (43 A) = 0,68 6. H-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2 5,72 g Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2-ot 75 10 ml metanolban feloldunk és az oldatot 600 mg 10%-os palládiumos aktívszén hozzáadása után szobahőmérsékleten széndioxidabszorbció közben hidrogénezzük. A hidrogén felvétel kb. 5 óra eltelte után befejeződik, ekkor a katalizá-15 tort kiszűrjük, az oldatot szárazra bepároljuk. Így 4,74 g pentapeptidamidot kapunk, amorf, kromatográfiai szempontból egységes por alakú termék formájában. A termék vékonyrétegű kramatografálás so-20 rán szilikagélen az alábbi R/-értékeket mutatja: R/ (52) = 0,40 R/ (100) = 0,35 25 - , 7. Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2 Az .1. példa szerint előállított 3,35 g Z-Lys-30 (BOC)-Lys(BOC)-Pro-OH-t 20 ml vízmentes dimetilformamidban feloldunk és 0,65 ml trietilamin hozzáadása után —15°-ra lehűtüntk. Ez után —15°-on 0,58 ml pivaloilkloridot csepegtetünk hozzá. 6 perc eltelte után 3,34 g H-Val-35 -Lys(BQ'C)-Val-Tyr^Pro-NH2 10 ml vízmentes dimetilformaimidban képzett és előre lehűtött odatát adjuk hozzá és a reakcióíkeveréket 20 percig —10°-om, 5 óra hosszat 0°-on, végül 2 óra hosszat 20°-on keverésben tartjuk. A fel-40 dolgozás úgy történik, hogy a reakciókeverékhez 70 ml etilacetátot és 50 ml vizet adunk, a szerves fázist egymást követően 0,1 mólos citromsavval, 2°/(r os amimóniaoldattal és vízzel extraháljuk, nátriumszulfát felett szárítjuk az 45 oldószert ledesztilláljúk. A porszerű amorf maradék súlya 5,74 g; a termék vékonyrétegű kromatografálás során szilikagélen csak kisebb szennyeződéseket mutat és további tisztítás nélkül további reakcióiba vihető. A termék R/-50 értéke 9 :1 arányú kloroform-imetanol-elegyben 0,23. 8. H-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Vial-Tyr-Pro-NHa 55 5,7 g fenti oktapeptid származékot 100 ml metanolban feloldunk és az oldathoz 550 mg 10%-os palládiumos aktívszenet adunk. Az oldatot légköri nyomáson telítésig hidrogénezzük. A katalizátort a hidrogénezés végén kiszűrjük, 60 a kiszűrt katalizátort metanollal átöblítjük és a szűrlettel egyesítjük, végül a szűrletet szárazra bepároljük. A bepárlásnál nyert fehér, habos maradékot 100 ml kloroformban feloldjuk, 20 ml 2 n ecetsavval extraháljuk, a 65 kloroformos fázist ezután 20 ml-re bepároljük, 7
