156157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikofenolsav előállítására
156157 határozás érzékenységét a várható alacsonyabb koncén tr ácsi óknak megfelelően állítjuk be. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: Hozzáadott só (súly/térfogat%) Mikofenolsav-koneentráció 164 óra után, mg/l Kontroll (só hozzáadása nélkül) MgS04 • 7H2 0 0,001% 0,01 % 0,05 % Ca(N03 ) 2 -4H 2 0 0,008% 0,03 % Ba(N03 ) 2 0,002% 0,01 % 42 48 211 226 28 42 21 21 Hozzáadott só (súry/térfogat%) Mikrafenolsav-koncentráció 164 óra után mg/l Sr(N03 ) 2 .4H 2 0 0,003% 0,016% 14 14 A fenti eredmények — különösen a 0,01% és 10 0,05% MgS04 • 7H2 0 jelenlétében kapott értékek — a magnézium lényeges és specifikus szenepét igazolják. 15 6. példa: Az alábbiakban ismertetésre kerülő táptalajokkal azonos körülmények között két fermentációt (5 literes nagyságrendben) hajtunk végre: Fermentor száma 7A 8A Körülmények: levegőztetés (lit/pere) hőmérséklet C° keverés (fordulat/perc) Táptalaj: Glukóz NH4 N0 3 KH2 P0 4 Nyomelem-koncentrátum (lásd 1. példa) MgS04 -7H 2 0 A ferment or okban levő táptalajt a Penicillium stoloniferum törzs (I. C. I. ACC 438 ill. I. M. I. 126540 számú törzs) spóráival beoltjuk és bizonyos időközönként mintát veszünk. Az egyes minták pH^ját 10 N káliumhidroxid-oldattal lOnre beállítjuk, majd keverjük és szűrjük. A szűrletet citromsawal pH=2 értékig megsavanyítjuk és benzollal extraháljuk. A 2,5 2,5 23 23 712 712 12 súly/tfo/0 12 0,19 súly/tfo/0 o,: 0,01 súly/tfo/o 0,5 0,2 térf.% o,: 0,1 súly/tf% 0,01 súly/tf% 0,19 súly/tf% súly/tfo/o térf.%, 0,002 súly/tf% benzolos oldatot 0,02 N nátriumhidroxid-oldattal visszaextraháljuk. A vizes oldatban nátriumsó alakjában jelenlevő mikofenolsav koncentrációját spektrofoto'fluorimetrikusan határozzuk meg. (338 xnp, aktiváló hullámhosszal mérjük a fluoreszcens emissziót 428 m/x-nál). Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: Idő 7A fermentor 8A fermentor száraz magnémikofeszáraz magnémikofe(óra) súly zium nolsav súly zium nolsav mg/g mg/ml mg/l mg/g mg/ml mg/g 168 191 10,1 9,5 0,12 0,12 125 195 Az eredmények a magnézium-forrás szükségességét igazolják. Megjegyezzük, hogy a jelen kísérletnél alkalmazott táptalajok KH2 P0 4 -t ártalmukban is különböznek, azonban minthogy semmilyen bizo- 60 nyíték nincs arra nézve, hogy a foszfortartalom csökkentése a mikafenolsav termelését fokozná, valamint tekintetbevéve, hogy a hasonló, azonban magasabb kezdeti foszfortartalom alkalmazásával végrehajtott kísérleteknél a kapott ti terek azonos nagyságrendbe tartoznak, a kapott 65 6,0 6,8 Nulla Nulla 55 <50 eredmények azt igazolják, hogy a specifikus hatást a magnézium hiánya okozza. Ezt a megállapítást az 5. példában ismertetett kísérlet is alátámasztja. A jelen példában leírt kísérletnél a két fermentorból levett mintákat vékonyrétegkromatográfiás analízissel standard mikafenolsav-oldatokkal hasonlítjuk össze. A 7A fermentorból vett mintákban a mikofenolsav könnyen kimutatható, ezzel szemben a 8A fermentor mintáiban a jellemző foltok nem fejlődtek ki. Ezen 4
