156076. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anti-Rh globulin előállítására

3 linókat, valamint különféle lipideket tartalmaz. A találmány szerinti anti-Rh globulin specifikusan gamma G globulinnák tekinthető. Az eimlberi vérplazma fraíkcionálását az anti-Rh globulin kinyerésére a csatolt folyamatábra sze- 5 rint végezzük. Az emberi vérplazma frakcionálási lehetősége a vérplazmában található különféle komponensek oldhatóságától függ. A frakcionálas minden egyes lépésében a frakcionálas elválasztási hatásfoka és az anti-Rh glo- 10 bulin szempontjából nem kívánt komponensek végső eltávolítása a kísérleti körülményék, mint pH, hőmérséklet, a kicsapandó anyag koncentrációja és a rendszer ionerőssége által van meghatározva. 15 A különböző alacsony dielektromos állandójú szerves oldószerek, mint az aceton és alkoholok, a proteineket kicsapják és így a vérplazma frákcionálásánál felhasználásra kerül- 20 nek. A jelen eljárásban szerves oldószerként metanolt használunk. A frakcionálas különböző lépéseiben szükséges kritikus ionerősség fenntartása a metanol használatától függ. 25 Abból a célból, hogy a proteinek denaturálódását a frakcionálas közben elkerüljük, a lecsapást alacsony hőmérsékleten végezzük. Mivel a proteinek oldhatósága a hőmérséklettől függ, így a frakcionálas minden egyes lépésé- 30 ben a hőmérsékletet a lehető legalacsonyabbra választjuk, amely így lehetővé teszi a kívánt mértékű elválasztást és a denaturálódást megelőzi. A csatolt folyamatábrára való hivatkozással 35 a következőkben a frakcionálási folyamatot részletesen ismertetjük. A fralkcioinálásnál teljes emberi vérplazmából indulunk ki, ezt 1 C° — 1 C°-ra lehűtjük. A lehűtött plazmát 1 C° ± 1 C° hőmérsékleten centrifugáljuk és a hidegen old- 40 hatatlan csapadékot elöntjük. A felülúszó fázist ecetsavval 7,2 ± 0,2 pH-értékre állítjuk be, amik oris ionerőssége 0,136 g ion/l. Ezután a frakcionált rész metanoltartalmát 10,7 ± 0,1% (v/v) koncentrációira állítjuk be, a metanolos 45 oldatot — 5 ± 0,5 C° hőmérsékleti értéken centrifugáljuk. A centrifugálásnál kaDott I. felülúszó fázist hűthető edénybe felfogjuk, az I. csapadékot — amely fő tömegében fibrinogen komponensekből áll — elöntjük. 50 ,3 liter I. felülúszó fázishoz hűtés közben metanolt, ecetsavat és nátriumacetátot adunk, lay ezen frakcionált rész metanolkoncentrációját 33,3% ± 0,05%-ra, ionerősségét 0.086 ± 0,005 g ion/l-re, pH-értékét 6.9 értékre állítjuk be. 55 Hűtés után az előbbi módon kezelt frakciót állni hagyjuk, majd az oldatot —5 ± 0,5 C°-on centrifugáljuk. A centrifugaedényből a II. + III. csapadékot elkülönítjük. A felülúszó II. + III. fázist — amely alfa- és béta-globulint, vala- 60 mint ÜDideket tartalmaz — elöntjük. A II.+III. csapadék főtömegében béta- és gamma-globulinból, valamint izoagglutininből áll, emellett azonban prothrombint, plazrnrnogént, koleszterint és egyéb lipideket is tartalmaz. 65 4 A II. + III. csapadékot 0 C°-on jeges vízben szuszpendáljuk. A hőmérsékletet 0 C° körül tartjuk, majd a szuszpenzióíhoz keverés közben dinátriumfoszfát oldatot adunk, amellyel 7,2 ±0,2 pH-értéket állítunk be. A szuszpenzió metanolkoncentrációját 26,7 ± 0,2%-ra szabályozzuk —10 C°-on metanol hozzáadásával. A dinátriumfoszfát oldat beadagolása következtében az oldat ionerőssége 0,0052 ± 0,0005 g ion/l lesz. A fenti oldatot —5,5 ±0,5 C°-on centrifugáljuk. A yö-globulint, koleszterint ós egyéb lipideket tartalmazó II. + III. W felülúszó fázist elöntjük. A II. + III. W csapadékot a centrifugaedényből eltávolítjuk. Ez a csapadék főtömegében giamma-gloibulinokat, izoagglutinint, plazminogént és prothrombint, továbbá kevés /?-globulint, koleszterint és egyéb lipideket tartalmaz. A II.+III. W csapadékot jeges vízben szuszpendáljuk, majd a szuszpenzióhoz nátriumacetátos puffer oldatot adunk. Ezután az oldat metanolkoncentrációját metanol beadagolásával 22,7 ± 0,2%-ra állítjuk be, az oldat 5,2 ± ±0,2 pH^értékű, ionerőssége pedig 0,013 ±0,005 g ion/l. A fenti oldatot —6 ±0,5 C°-on centrifugáljuk. Az izoagglutinint, plazminogént a prothrambint tartalmazó III. csapadékot elöntjük. A III. felülúszó fázis főtömegében gamma-globulinokat, kisebb mennyiségben fibrinogént és lipideket tartalmaz. A III. felülúszó fázist keverés közben diatóma-földdel kezeljük, a kapott keveréket pedig szűrőprésen szűrjük. A szűrőprés felületén acetát-metanolos pufferral előszűrőréteget képzünk. A III. felülúszó fázist szűrjük, a szűrlethez nátriumkloridot és nátriumhidrogénkarbonátot adunk. A szűrlet pH-értéke 7,2 ±0,2. A szűrlethez —5 C° alatti hőmérsékleten metanolt adagolunk és így a metanolkoncentrációt 33,2 ± 0,2%-ra állítjuk be. A metanolos oldatot —6 ±0,5 C°-on centrifugáljuk, a felülúszó fázist pedig elöntjük. A kapott II. csapadékot jeges vízben szuszpendáljuk és fagyasztással szárítjuk, a megszárított por alakú terméket pedig —5 C° vagy ez alatti hőmérsékleten tároljuk. Az előállított II. csapadék anti-Rh-gamma-G-globulinból áll és plazminogéntől, lipidektől és 19 S globulin októl teljesen mentes. A találmány szerinti eljárás további részleteit az alábbi kiviteli példa szemlélteti. Emberi vérplazmát 1 C°±l C°-ra hűtünk le. A plazmát Sharples szupercentrifugában centrifugáljuk, amely 3 szárnnyal ellátott dobot tartalmaz. A centrifugálást 1 C° ± 1 C°-on végezzük és az adagolási sebességet 1000 ± 50 ml térfogatmennyiségre állítjuk be percenként. A hideg oldhatatlan csapadékot elöntjük. A felülúszó fázis pH-értékét 7,2 ± 0,2-re állítjuk be 10 n ecetsavval, így az ionerSsség. 0,136 g ion/l lesz. Az elegy metanoltartalmát 10,7 ± 0.1 térfogatszázalékra (v/v) szabályozzuk azáltal, *