156059. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pregnás-sorba tartozó 17 alfa-aciloxi-21-hidroxi-vegyületek előállítására
5 ságúak, és ez a hatás tovább tart, mint a 17a-hidroxi-vegyületeké. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa: 10 g élesztő-extraktuffiból (Difco), 4,5 g Na2 HP0 4 -ből és 3,4 g KH 2 P0 4 -ből vízzel 1000 ml-re kiegészítve táptalajt készítünk. Miután a pH-t 2n nátriumhidroxid-oldattal 6,2-re állítottuk be, az elegyet 20 percen át 120 C°-on sterilizáljuk. A táptalajt ezután agar táptalajon (a fenti táptalaj 2% agárral) tenyésztett Flavobacterium dehydrogenans kultúrával oltjuk be, és az elegyet 32 órán át, 30 C°-on, 2 db kétliteres rázólombikban, forgó rázógépen (250 percenkénti fordulatszámmal) rázzuk. 10 db kétliteres, egyenkint 1 1 fenti táptalajt tartalmazó rázólombikba 50 ml az előzőekben ismertetett módon készített oltókultúrát adunk, majd a lombikokat 18 órán át a fenti körülmények között rázzuk. Ezt követően 5 g S-17a,21-diacetát 100 ml vízzel készített szuszpenzióját adjuk mindegyik lombikba, majd a kultúra pH-ját 0,1 m foszfát-pufferrel 6,2-re állítjuk be, és az inkubálást azonos módon folytatjuk. Papírkromatogrammokból kitűnik, hogy 8 óra múlva az egész szubsztrátum S-17«-monoaoetáttá alakult, A kultúrákat egyenlő térfogatmennyiségű meleg metilizobutilketonnal másfél órán át tartó élénk keveréssel extraháljuk. Az extra'ktumot csökkentett nyomáson kis térfogatra bepároljuk, a kikristályosodott terméket leszűrjük, metilizobutilketonnal mossuk és szárítjuk. Az így kapott 39,8 g kristályos terméket 200 ml meleg acetonból kristályosítjuk át úgy, hogy az oldatot 1 g aktív szénnel kezeljük és kb. 80 ml-re pároljuk be. Ily módon 35,4 g tiszta S-17a-monoaoetátot nyerünk. Az anyalúgokból további 7,4 g S-17«-monoacetátot különíthetünk el, így a hozam az elméleti hozam 94,8%-ára nő. Olvadáspont 203—206 C°; [«]D =+40,8° (c = = 1 dioxán); E^ = 432 241 m/x-on metanolban. 2. példa: Flavobacterium dehydrogenans oltókultúrát készítünk az 1. példa szerinti módon, amellyel újra 10 db 2 l-es, egyenként 1 1 fenti táptalajt tartalmazó lombikot oltunk be. 18 órán át tartó növekedés után mindegyik lombikba 10 g, 200 cm3 vízben szuszpendált S'^na^l-trihidroxi-S-pregnén-S^O-dion 3,17,21--triacetátot adunk, majd a pH-t foszfát-pufferral 6,2-re állítjuk be, és az inkubálást azonos módon folytatjuk. Pap,rkramatogrammokból kitűnik, hogy 24 óra alatt az egész szubsztrátum S-17a~monoacetáttá és kis mennyiségű S-vegyületté alakult, ezek szennyezés nyomokat tartalmaznak. 6 A kultúrákat egyenlő térfogatmennyiségű meleg metilizobutilketonnal másfél órán át tartó élénk keveréssel extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson kis térfogatra be-5 pároljuk, a kikristályosodott terméket leszűrjük, metilizoibutilketonnal mossuk és szárítjuk. Az így kapott 68,4 g terméket 300 cm3 meleg acetonból átkristályosítjuk úgy, hogy az oldatot 1 g aktív szénnel kezeljük, és a szűrle-10 tet kb. 130 cm3 -re bepároljuk. Ily módon 61,6 g tiszta S-17a-acetátot nyerünk, amely azonos az 1. példa szerint nyert termékkel. Az anyalúgokból további 12,15 g S-17«-acetátot különíthetünk el, így a hozam az el-15 méleti hozam 90,1%-ára emelkedik. 3. példa: Flavobacterium dehydrogenans oltókultúrát 20 készítünk az 1. példa szerinti módon. Ezután 2 db 500 iml-^es, egyenként 100 ml fenti táptalajt tartalmazó lombikba 5—5 ml oltókultúrát viszünk. A két lombikot 18 óra hosszat a fenti megadott körülmények között rázzuk. 25 Mindegyik lombikba 500 mg 6ar-fluor-16a-metil-17a,21-dihidroxi-4-pregnén-3,20-dion-17x,21-diacetát 10 ml vízzel készített szuszpenzióját adagoljuk, majd a kultúra pH-ját 0,1 mólos foszfát-pufferral 6,2-re állítjuk be, 30 és az inkubálást azonos módon folytatjuk. Papírkromatogrammokból kitűnik, hogy 8 óra alatt a teljes szubsztrátum átalakult. A kultúrákat egyenlő térfogatmennyiségű meleg metilizobutilketonnal másfél órán át 35 tartó élénk keveréssel extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson kis térfogatra pároljuk be, a kikristályosodott terméket leszűrjük, metilizobutilketonnal mossuk és szárítjuk, így 436 mg tiszta 6ff-fluor-16ot-metil-40 -21-hídroxi-4-pregnén-3,20-dion-17a-aoetátot nyerünk. Az anyalúgokból további 416 mg terméket különíthetünk el, így a termelés az elméleti termelés 93,7%-ára nő. 45 Olvadáspont: 188—190 C°. Elemzési eredmények számított C 68,55% H 7,91% talált C 68,41% H 7,89%. 50 A 6a-iluor-16a-mietil-17a,21-dihidroxi-4-pregnén-3,20-dion-17a,21-diacetátot a Turner, R. B. által leírt módon állíthatjuk elő [Id. J. Am. Chem. Soc. 75, 3489 (1953)], és az alábJW fizi-55 kai tulajdonságokkal rendelkezik. Olvadáspont: 226.5—228,5 C°; EÍ°m= 350 236 m/i-on metanolban. Elemzési eredmények 60 számított C 67,51% H 7,62% talált C 67,54% H 7,53% Infravörös spektrum sávok 1735—1728, 1682, 65 1668, 1625 és 879 cm_1 -nél 3
