155927. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antidiuretikus hatású polipeptid előállítására
155927 5 6 Htjuk és 3 ml dimetilformamidban oldott 2,7 g L-fenilalanin-metilésztert elegyítünk hozzá. A reakciókeveréket 12 órán át 0 C°-on és 2 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a pépszerű 5 maradékhoz feleslegben vizet adunk. A kivált terméket leszívatjuk és vizes etanolból átkristályosítjuk. Kitermelés: 7,6 g (97%), olvadáspont: 151—,152 C°, [a]25D = —17,5 ±0,5° (c = 0,5, dim etilformamid.). Az irodalom [Helv. Chim. 10 Acta 49, S95 (1966)] 147—148 C° olvadáspontot és [aPV==-Hl7,5±l0 (c=l,45, dimetilformamid) iajlagos--forgatási értéket ad meg olyan, termékre, amelyet 68%-os kitermeléssel /?-benzil-tiopropionsav-triklórfenilészter és L-tirozil- jg -L-femlanalm-metilészter kapcsolása útján állítottak elő. /?-benzil-tiopropionil-L-tirozil-L-femlalanin-hidrazid 20 14 g /J-benzil-tiopropioniUj-tirozil-L-fenilalanin-metilésztert 100 ml metanollal és 6 ml 80%-os hidrazinhidrattal visszafolyató hűtő alatt 2 órán át forralunk. A kivált termieket le- 25 szívatjuk, a szűrőn metanollal és éterrel mossuk és dimetilformamid-víz keverékéből c* .kristályosítjuk. Kitermelés: 10,1 g (72%), olvadáspont: 248—250 C°, [a]24D = ^21,9±0,5 U (c = 0,55, dimetilformamid). Az előző példában em- go lített irodalom 251—253 C° olvadáspontot ad meg. /5-benzil-tiopropionil-L-tirozil-L-fenilanalil-L-glutaminil-L-aszpairaginil-S-benzil-L-oisztem-mefcilészter 35 0,8 g /S-benzil-tiopropionil-L^tirozil-L-ferulalanin-hidraziidot az ismert eljárás szerint [Collection Czechoslov. Chem. Commun. 30, 1853 40 (1965)] 7,2 g L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-cisztein-metilészterrel kondenzálunk. A reakcióterméket dimetilformamidból és vízből átíkristályosítjuk s ekkor 11,3 g (76%) terméket kapunk, melynek olvadáspontja 253—255 45 C°, [a]25D = —29,6 ±0,5° (c = --0,5, dimetilformamid). C48 H 57 N 7 O 10 S 2 • V2 H2 0 (965,1) képletre a számított értékek: C= 59,73%, H = 6,20%, N = = 10,17%. A talált értékek: C = 59,61%, H = 50 = 6,2:3%, N = 10,23%, mely dimetilformamidból történő átkristályosítás után nem változik. [a]25 D = —33,4 ±0,5° (c = 0,5, dimetilformamid). C47 H 57 iN 9 0 9 S 2 (956,1) képletre a számított értékek: C = 59,04%, H = 6,01%, N = 13,19%. A talált értékek: C = 59,04%, H = 6,16%, N = 13,25%. '/í-benzil-tioproipionil-L-tirozil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aiszparagiml^S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-NG -tozil-íD-arginil-glicinamid A fenti peptidet a /ä-benzil-tiopropionil-L-tirozil-L-fenilalaml-L-glutammil-L^aszparagi_ nil-S-benzil-L-cisztein-hidrazidból és az L-pro-Ml^NG-tozil-'D-arginil-glicinamidból az ismert eljárás szerint ( lásd az említett irodalmi utalást) 68%-os kitermeléssel állítjuk elő. A termék olvadáspontja 223—225 C°. C^H^N^O^Sa (1405,65) képletre a számított értékek: C = '57,24%, H = 6,02%, N = 13,95 " %. A talált értékek: C = 57,33%, H = 6,01%, N = 13,99%. l^ezamino-8-D-arginiin-vazopresszin 0,5 g /5-benzil-tiopropionil-L-ti:rozil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszapiaraginil-,S~benzil-L-ciszteinil-I^proliljNG -tozil-D-arginil-glicinamidot folyékony ammóniában nátriumánál az ismert eljárással (lásd az említett citátumot) redukálunk. Az ammónia ledesztillálása után kapott maradékot 800 ml 5%-os ecetsavban feloldjuk, az oldhatatlan részt kiszűrjük, a szűrlet pH-értékét nátriumhidroxiddal 6,5—7-re beállítjuk és az oldatot az ismert módon oxidáljuk. [J. of Biol. Chem. 238, 1411 (1963)]. Ezt követően a reakciókeverék pH-értékét ecetsavval 4,0—4,5-re beállítjuk, a peptidet karboxilioncserélő-oszlopra visszük, 50%,-os ecetsavval eluáljuk és liofilizálással elkülönítjük. A nyersterméket ismert módon [Collection Czechoslov. Chem. Commun. 31, 310 (1966)], hordozó nélküli nagyfeszültségű elektroforézissel tisztítjuk. A kitermelés a liofilizált termékre 100'—200 mg, [a]25D = _,65±2 0 (c = 0,2 1 M ecetsav). C4e H 64 N 14 Oi 2 S 2 • 2CH3COOH (UÖ9,3) képletre a számított értékek: C = 50,49%, H == 6,10%, N = 16,48%. A talált értékek: C = 50,39%, H = 6,32%, N = 16,45%. ^-benzil-tiopropionil-L-tirozil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-cisztein-hidrazid 10,8 g '/?-benz:íl-tiop'ropionil-L-ti:rO'ZÍl-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszpa:raginil-S-beinzil-L-cisztain-metilészter 160 ml dimetilformamiddal készült oldatához 12 ml 80%-os hidrazinhidrátot adunk és a reakciókeveréket 12 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált terméket leszívatjuk, a szűrőn metanollal és éterrel mossuk, majd szárítjuk. A kitermelés 6,7 g (62%). A termék olvadáspontja 265—268 C°, Az amiinosa,vösszetétel vizsgálati eredménye: 1/2 cisztin 0,40, tirozin 0,98, fenilalanin 1,03, 55 glutamin 1,05, aszparagin 1,00, prolin 1,03, a:rginin 0,98, ghcin 0,95. Szabadalmi igénypontok: 60 1. Eljárás az (I) képletű, antidiuretikus hatású polipeptid I 1 Mep-Tyr-Phe-Glu-Asp-CyS-Pro-D-Arg-Gly-NH2 1 2345 67 89 65 I. 3
