155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
17 4. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg—NH2 50 mg védett oktadekapeptidamid védőcsoportjait az 1. példa 11. lépésében leírt módon távolítjuk el. A szabad oktadekapeptid-amid kitermelése közel kvantitatív. 7. példa: 1. lépés H-Arg(N02 )-Arg(N0 2 )-Pro—OH • HBr '25 ml jégecetben feloldunk 6,5 g Z-Arg(N02 )-Arg(N02 )-Pro—OH védett tripeptidet {K. Sturm, R. Geiger, W. Siedel: Ber. 96, 609 (1963)] és 25 ml 4 n jégecetes brómhidrogént adva hozzá állni hagyjuk. A pezsgés megszűnte után 200 ml étererei kicsapjuk a tripeptid^brómhidrátot, az étert dekantáljuk, a csapadékot ilyen módon mossuk éterrel és izopropanollal, végül szűrjük, izopropanollal a szűrőn is mossuk és szárítjuk. 5,4 g '(90%) anyagot kapunk. Rf1 0,0, Ríviz 0,5—0,í6. 2. lépés Z-Lys(B0C)-Lys(B0C)-Arg(N02 )-Arg(N0 2 )-Pro—OH 7,8 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)—N2 H 3 dipeptidhidrazidból az 5. példa 2. lépés a) pontja szerint kloroformos azid-oldatot készítünk és ezt az alábbi oldathoz öntjük: 7,5 g tripeptidbrómhidrátot feloldunk 17 ml dimetilformamidban és 4,62 ml trietilamin hozzáadása után egyesítjük a fenti azid-oldattal. A kloroformot vákuumban ledesztilláljuk és a re akció elegyet állni hagyjuk szobahőmérsékleten két napig. A dimetilformamid ledesztillálása után a maradékot szilikagélből készült oszlopon kromatografáljuk etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:10:3:5,5) elegyben'. A tiszta védett pentapeptidet tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és 0 C° hőmérsékleten eldörzsöljük 1 n sósavval, vízzel. A mosófolyadékokat dekantálással távolítjuk el. A maradék sűrű olajat kloroformban oldjuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A párlási maradékot éterrel eldörzsölve 5,1 g (42%) védett pentapeptidet kapunk. Rf1 0,45^0,55. [a]20 D --19° (c = 1, metanolban). Analízis: C47 H 77 0 16 N 15 (1108,21); számított: C 51,6, H 6,95, N 18,9; talált: C 51,5, H 7,0, N 19,0. 3. lépés a) Z-Lys(BOC)-Lys(B0C)^Arg(N02 )-Arg(N0 2 )-Pro—ONP 18 0,65 g védett pentapeptidet feloldunk 3,0 ml dimetilformamidban és előbb 0,032 ml trietilamint, majd —10° hőmérsékleten 0,059 ml klórszénsavetilésztert adunk hozzá. 10 percig hűtés 5 közben állni hagyjuk, majd 0,24 g p-nitrofenolt adunk hozzá és szobahőmérsékleten állni hagyjuk éjszakán át. A dimetilformamidot ledesztilláljuk és a maradékot szilikagélből készített oszlopon kromatografáljük kloroform-metanol 10 (9:1) eleggyel. A főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és éterrel eldörzsöljük. 0,47 g (65%) védett pentapeptid-p-nitrofenilésztert kapunk. Rf4 0,3^0,4. [a]20 D —20° (c = 1, metanolban). 15 Analízis: C 33 H 80 O 18 N 16 (1229,130); számított: N 18,2; talált: N 18,1. 20 b) Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg(N0 2 )-Arg(N02)-Pro—OPCP 4,0 ml dimetilformamidban feloldunk 1,62 g védett pentapeptidet, 0,45 g pentaklórfenolt (a 25 pentaklórfenil gyök: PCP—) és 0,4 g diciklohexilkarbodiimidet. A reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, a kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, a dimetilformamidot bepároljuk és éterrel eldörzsöljük és 1 ml kloroform-aceton-30 -víz (40:40:1) elegyben feloldjuk, majd szilikagélből készített oszlopon a kloroform-aceton-víz eleggyel kromatografáljük. Az aktív észtert tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és éterrel eldörzsöljük. 1,4 g (70%) 35 anyagot kapunk. Rf 4 0,55-45,65. Rf 0,45—0,55 kloroform-aceton-víz (40:40:1) rendszerben. 'Analízis: C53H76 0 16 N lg Cl 5 (1356,54); számított: N ,15,4, Cl 13,05; 40 talált: N 15,35, Cl 13,1. 4. lépés Z-Lys(BOC)-Lys(B0C)-Arg(N02 )-Arg(N0 2 )-45 -Pro—NH 2 a) 1,0 g védett pentapeptid-p-nitrofenilésztert {3. lépés a) pont) feloldunk 10 ml metanolban és 3 ml tömény ammóniumhidroxidot adva hozzá éjszakán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot kloroform-víz elegyben feloldjuk, a kloroformos oldatot mossuk vízzel, szárítjuk és bepároljuk. A párlási maradékot szilikagélből ké~ 55 szített oszlopon kromatografáljük kloroform-metanol-víz (40:40:1) eleggyel. A főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk, éterrel eldörzsöljük. 0,8 g (89%) védett pentapeotddamidot kapunk. Rf2 0,25—0,35, Rf 8 60 0,30—0,40. b) 0,41 g védett pentapeptid-pentaklórfenilésztert (3. lépés, b) pont) 4,1 ml metanolban feloldunk és 1.2 ml tömény ammónium-hidroxiddal amidáljuk. A reakcióelegyet az a) pont-65 ban megadott módon feldolgozva 0,24 g (74%) 9
