155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
31 berlite IRA—400-as gyantából készült oszlopon csurgatjuk át. .120 ml vízzel mossuk és az egyesített vizes oldatokat liofilizáljuk. (127,5 mg 96%)-Aminosavanalízis: Lys 3,86 (4), Arg 2,95 (3), His 1,2 (1), Asp 1,01 (1), Ser 2,05 (2), Glu 2,05 (2), Pro 2,9 (3), Gly 3,0 (3), Ala 0,97 (1), Val 2,85 (3), Met 0,96 (1), Tyr 1/77 (2), Phe 1,04 (1), Tyr/Try = 2,01; aTMD = —78,4°; R/*: 0,22. 12. példa: 1. lépés Z-Ser-Ala-OBu' 7,5 g (29,5 mmól) Z-Ser—N2 H 3 -ot 80 ml dimetilformamidban szuszpendálunk, —10 C°-ra hűtjük és 7,3 ml tömény sósavat, majd 2,04 g NaN02 tömény vizes oldatát csepegtetjük hozzá. Öt perces keverés után 12,4 ml trietilaminnal óvatosan lúgosítjuk, majd 16 ml dimetilformamidban oldott 4,5 g (31 mmól) Ala-OBu'-t adunk az azid oldathoz. Egy órát —10°-on kevertetjük, majd szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap csökkentett nyomáson bepároljuk és az olajos maradékot 150 ml etilacetát és 30 ml víz elegyében oldjuk. Miután háromszor 30 ml 10%-os citromsav, háromszor 30 ml 8%-os NaHC03 oldattal és 30 ml vízzel kiráztuk, az etilacetátos oldatot Na2 S0 4 -on szárítjuk és bepároljuk. Az olajos dipeptidésztert petroléter alatt megszilárdítjuk és szűrjük. Termelés: 8,4 g (76%) 10%-os etanolból kristályosítva. Op.: 63— 65 C°. C18 H 26 N 2 0 6 + 1/3 H 2 0 (372,42). Számított: C: 58,1%; H: 7,3%; N: 7,5% Talált: . 58,2 7,3 7,8 2. lépés H-Ser-Ala-OBu' • HOAc 10,0 g (27,4 mmól) Z-Ser-Ala-OBu'-t 100 ml 80%-os ecetsavban oldunk és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A széndioxid-fejlődés megszűnése után a katalizátort kiszűrjük és az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk. Az olajos maradékot éter alatt megszilárdítjuk és szűrjük 6,9 g (87%). Op.: 76— 78 C°; R/i 0,55. 3. lépés Z-Glu(NH2 )—OPCP 14,0 g (50 mmól) Z-Glu(NH2 )-t, 13,3 g (50 mmól) pentaklorphenolt és 10,5 g (50 mmól) diciklohexilkarbodiimidet oldunk 150 ml dimetilformamidban 0 C°-on. A reakcióelegyet egy órát 0°on tartjuk, majd hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. Másnap a kivált diciklóhexilkarbamidot szűrjük és az oldatot vákuumban bepároljuk. A kristályos maradékot vízmentes éter- ( 32 rel szűrőre visszük. 17,25 g (65%) aktív észtert kapunk. Op.: 179—181 C°. 4. lépés 5 Z-Glu(NH2 )-Ser-Ala-OBu' 30 ml dimetilformamid és 5 ml vízmentes piridin elegyében 4,2 g (14,4 mmól) Ser-Ala-10 -OBu' dipeptidésztert és 7,6 g (14,4 mmól) Z-Glu(NH2 )-OPCP-t oldunk. A reakcióelegyet 20 órás állás után csökkentett nyomáson bepároljuk és a visszamaradó olajat éterrel, 8%-os NaHC03 , oldattal, vízzel mossuk. Szárítás után 15 4,8 g (67,5%) védett tripeptidésztert kapunk. Op.: 183—^185 C°. Analízisre vízből kristályosítva. Op.: 196—197 C° (193 C°-nál lágyul). d" 5. lépés Z-AspíOBu'J-GluíNH^-Ser-Ala-OBu' 4,1 g (8,3 mmól) Z-GlutNH^-Ser-Ala-OBu* 25 védett tripeptidésztert 400 ml metanolban melegen oldunk, szobahőmérsékletre hűtjük és 300 mg (8,3 mmól) sósavat tartalmazó sósavas metanolt adunk hozzá, majd csontszenes palládium jelenlétében a széndioxid fejlődés megszűnéséig :-° hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után a metanolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A visszamaradó szilárd habot 32 ml dimetilformamidban oldjuk és 3,45 g (8,2 mmól) Z-Asp(OBu( )—ONSu aktív észtert és 1,16 ml (3,3 35 mmól) trietilamint adunk hozzá. Két napi állás után a reakcióelegyet bepároljuk és az olajos maradékot éterrel megszilárdítjuk, szűrjük, éterrel, 8%-os nátriumhidrokarbonát oldattal és vízzel mossuk. Szárítás után 4,8 g (87,5%) védett 40 tetrapeptidésztert kapunk. Op.: 181—183 C°. C31 H 47 N 5 0 4 (685,75), számított: C: 55,9%; H: 7,1%; N: 10,6% talált: 55,9 7,2 10,6 6. lépés Z-Glu(OBuí )-Asp(OBu í )-Glu(NH 2 )-Ser-Ala-50 "OBuf .100 ml 80%-os ecetsavban oldott 6,0 g (9,0 mmól) védett tetrapeptidésztert a széndioxid-fejlődés megszűnéséig csontszenes palládium 55 jelenlétében hidrogénezünk. A katalizátor kiszűrése és az oldószer ledesztillálása után nyert olajos tetrapeptidészterről még kétszer 20 ml etanolt desztillálunk le, majd 20 ml dimetilformamidban oldjuk és 5,3 g (9,0 mmól) Z-60 -Glu(OBu')—OPCP aktív észtert adunk hozzá. A reakcióelegyet másnapig szobahőn állni hagyjuk. Ekkor csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot éterrel megszilárdítjuk, szűrjük és a szűrőn éterrel, 8%-os NaHC03 oldattal, végül 55 vízzel mossuk és szárítjuk. 6,6 g (86%) védett 16
