155873. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tisztított amiloglukozidáz-készítmények előállítására

MAGTAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1967. III. 25. Hollandiai elsőbbsége: 1966. III. 26. Közzététel napja: 1968. IX. 25, Megjelent: 1969. X. 15. (OA—340) 155873 .^íVMMiWlfrs <4V K3í£ír Szabadalmi osztály: 12 o 26—27 IxciTizeub.üái osztály: C 07 b Decimal osztályozás: Feltaláló: • Moelker Huibert Cornells Theüs vegyész, OSS, Hollandia Tulajdonos: N. V. ORGANON cég, OSS, Hollandia Eljárás tisztított amiloglukozidáz-készítmények előállítására A találmány tárgyát amiloglukozidáz-készítmények tisztítására szolgáló eljárás képezi. Ismeretes, hogy az amiloglukozidáz enzim — amely glukamiláz, gamma-amiláz és (tévesen) maltáz néven is szerepel az irodalomban — oly 5 •mikrobiológiai eredetű enzim, amely a keményítőt vagy az előzetesen már részlegesen hidrolizált keményítőt glukózzá lebontani képes. Ez a lebontás a molekula nem-redukáló végcsoportjánál kezdődik. 10 Az amiloglukozidáz-készítményeket rendszerint mikroorganizmusok, különösen gombák folyékony kultúra-közegéből és/vagy sejtanyagából nyerik. Kitűnő források az ilyen enzimkészítmények előállítására a Rhizopus, Endo- 15 myces és Aspergillus fajok kultúrái. Különösen az Aspergillus fajókat, pl. az Aspergillus nigert alkalmazzák széles körben az ilyen enzimkészítmények ipari előállítására, minthogy ezekből az enzim nagy hozammal nyerhető. En- 20 nek az előnyös forrásnak az értékét azonban csökkenti az a körülmény, hogy a kívánt amiloglukozidáz enzim termelése csaknem mindig együttjár nemkívánatos transzglukozidáz-enzim képződésével is. A transzglukozidáz az 25 (1 -*4) glukozid-kötéseket (1—6) glükozid-kötésekké alakítjuk át. Az így képződött izo-cukrok, mint izomaltóz, panóz és izomaltotrióz, nem bontható le már glukózzá az amiloglukozidáz enzim által, vagy pedig csupán nagy 30 nehézségek árán sikerül e lebontást végrehajtani [vö. pl. J. Biol. Chem. 232, 1002 (1962.)] így a glukóz hozam az izo-cukrok képződése következtében csökken, emellett a glukóznak a koncentrált keményítő-hidrolizátumokból való kikristályosítását is gátolja az izo-cukrok jelenléte. Végül az izo-cukrok nagymértékben rontják a glukóz-kristályosítás anyalúgjainak élelmezési célra való felhasználhatóságát is, keserű izük folytán. Világos tehát, hogy a transzglukozidáznak az amiloglukozidáz-készítményekben való jelenléte egyáltalán nem kívánatos. Ez a fő oka annak, hogy Rhizopus^-fajokat is alkalmaznak az amiloglulkozidáz előállítására, minthogy ezek kultúráiban nem képződik transzglukozidáz. A Rhizopus-fajokkal történő termelés hátránya azonban, hogy az elérhető hozamok jóval kisebbek, mint az Aspergillusfajok esetében. Emellett a Rhizopus süllyesztett kultúrában való tenyésztése — főként a micélium törékenysége folytán — igen nehéz. Különböző kísérletek történtek már az ilyen enzimkészítményeknek a transzglukozidáz eltávolítása útján való javítására. így a 849 509 sz. brit szabadalmi leírás oly eljárást isimertet, amelynek során szintetikus magnéziumszilikátokat alkalmaznak a transzglukozidáz szelektív adszorbeáltatására. Az eljárás hátránya azonban, hogy rosszul reprodukálható. 155873