155628. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lincomicin S előállítására
155628 9 Kromatográfiás tisztítás 10 hosszaknál (reciprok cm-ben kefej ezve) mutat csúcsokat: A fent leírt lincomicin S-t tartalmazó olajos anyagot kb. 2,0 pH-n feloldjuk metanolos sósavban. Ezt az oldatot éterhez adjuk hozzá, mire csapadék keletkezik. A csapadékot, amely lincomicinből, lincomicin B-ből, lincomicin C-ből és lincomicin S-ből áll, szűréssel elkülönítjük. Ezt a terméket azután rávisszük egy szilikagél kromatográfiás Oszlopra, melyet a kövekezőképpen készítünk: Szilikagélt (Merck-Darmstadt No. 7734, 0,05— 0,20 mm.) beleöntünt egy üvegcsőbe (belső átmérője 6,5 cm) és ott atmoszferikus nyomáson ülepedni hagyjuk. A fent leírt lincomicin S-t tartalmazó terméket abszolút metanolban oldjuk. Ezt az oldatot szilikagéllel keverjük össze úgy, hogy zagy képződjék, majd a keveréket vákuumban kb. 20 órán át szárítjuk. Az anyagot a szilikagél-oszlop tetejére vezetjük, föléje pedig újabb szilikagélt ágyazunk be, végül az oszlopot metiletilketon : aceton : víz (100 : 30 :5) oldószereleggyel eluáljuk. A kizárólag lincomicin S-t tartalmazó frakciókat a többi lincomicin-féleség előtt eluálhatjuk az oszlopról. A lincomicin S jelenlétét a már korábban leírt módon vékony-réteg kromatográfiával határozzuk meg. Azokat a frakciókat, amelyek kizárólag csak lincomicin S-t tartalmaznak, összegyűjtjük és szárazra pároljuk. A maradékot 1 n metanolos sósavban oldjuk kb. 2,0 pH-n. Ezt az oldatot ismét szárazra pároljuk. A maradékot abszolút metanolban oldjuk és az oldatot éterrel elegyítjük. Mialatt az elegyet forgó bepárlóban lassan betöményítjük, egy színtelen anyag kristályosodik ki, amelyet vékony-réteg kromatográfiával mint lincomicin S-t azonosíthatunk. Ezeket a kristályokat szűréssel elkülönítjük és szárítjuk. További kristályos lincomicin S-t nyerünk ki a fenti kristályosítási szűrletből, oly módon, hogy azt szárazra pároljuk, a maradékot abszolút metanolban lodjuk és ezf az oldatot etiléterrel elegyítjük Az elegyet mintegy 4 órán keresztül keverjük. Lincomicin S kristályokat kapunk, ezeket szűréssel elválasztjuk és szárítjuk. A lincomicin S-hidroklorid kémiai és fizikai tulajdonságai A kristályos lincomicin S-hidroklorid a következő fizikai és kémiai tulajdonságokkal rendelkezik: A C2oH3 8N 2 0 6 S • HCl • H20 képletre számolva: C, 49,12; H, 8,47; O, 22,95; N, 5,74; S, 6,57; Cl, 7,27. Molekulasúly: 488,5 (számított) Optikai forgatóképesség: [a]|f = + 144,5 (c, 0,38, vízben) Infravörös spektrum: a lincomicin S-hidroklorid KBr lemezben mérve a következő hullám-3350 (S> 1456 (M) 993 (M) 3060 (M) 1392 (M) 997 (M) 2960 (S) 1320 (M) 900 (W) 2920 (S) 1264 (M) 867 (W) 2865 (M) 1210 (W) 801 (M) 2720 (W) 1143 (M) 750 (W) 1680 (S) 1095 (S) 707 (W) 1562 (S) 1077 (S) 675 (M) 1545 (M) 1048 (S) 3310 (S) 1545 (M) T077 (S) 3060 (M) 1460 (S) (olaj) 1049 (S) 2950 (S) (olaj) 1378 (S) (olaj) 991 (M) 2920 (S) olaj) 1365 (M) 97T (M) 2860 (S) (olaj) 1338 (M) 900 (W) 2850 (S) (olaj) 1300 (M) 1262 (M) 867 (M) 2720 (M) 1210 (M) 801 (M) 1683 (S) 1142 (M) 713 (M) 1567 (M) 1095 (S) 675 (M) 10 A lincomicin S-hidroklorid ásványolaj-szusz-15 penzióban mérve a következő hullámhosszúságoknál (reciprok cm-ben kifejezve^ mutat csúcsokat: „, :; ... I 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A fenti infravörös spektrumokban a sávok intenzitását „S" „M" és „W" betűk jelölik és azok megközelítően a sávok szomszédságában lévő alapszinthez viszonyítottak. Az „S" jelű sávok intenzitása nagyságrendileg megegyezik a spektrum legerősebb sávjaival, az „M" jelű sávok intenzitása a legerősebbekhez viszonyítva ezek 1/3-a—2/3-a és a „W" jelű sávok erőssége kisebb a legerősebb sáv l/3-ánál is. Oldhatóság A lincomicin S-hidroklorid vízben és metanolban oldható. Mérsékelten oldható 95%-os alkoholban vagy abszolút etanolban és viszonylag oldhatatlan acetonban, etilacetátban, klórozott és telített szénhidrogénekben. Az előbbiek során megadott I. táblázatban lévő baktériumellenes spektrumot csöves hígítási próbával határoztuk meg BHI közegben (Brain Heart Infusion Broth, Difco, Detroit, Michigan). A próbacsöveket (18 X 150 mm) a szokásos módszerrel állítottuk elő, lásd Snell, E. E., Vitamin Methods, Vol. I., Academic Press, Inc., New York 1950, 327 oldal. A kísérleti közeg beoltására 18 órán keresztül 37 C°-on tenyésztett tesztmikroorganizmusokat használtunk. A próbák eredményét 20 óra múlva olvastuk le. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a II. képletnek megfelelő lincomicin S előállítására, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces lincolnériéís "var. lincolnensist vizes táp-65 közegben, 0,5 mg/ml—4 mg/ml mennyiségben > 5
