155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
155254 11 12 Acta 44, 15)9 (1961)] feloldunk IS ml forró metanolban és 6 ml 73%-os hidrazinhidráttal 4 órán át forraljuk visszafolyató hűtő alatt, Á reakció végén az oldatot töményítjük és a kristályos maradékot vízzel eldörzsöljiüik, szárítjuk. A nyert kristályos védett dipeptidhidrazid 7,8 g (910%). Ofp.: 136-H12I8 C°. Rf4 0,50— 0,60 (észternél 1,0). C30 H 50 O 8 N 6 (622,76). Számított: N 13,5%. Talált: 1ST 13,5%. 16. lépés: ' Z-Lys(BOC)-Lys!(BOC)-Arg(N02 )-Arg(N0 2 )-Pro^OH (15-49) 7,8 g Z-Ly&(BOe)-Lys(BOC)-N2 H 3 dipeptidhidrazidot (1. példa 15. lépés) feloldunk 125 ml diimetilíormamidban, és —10 C° körüli hőmérsékleten 50 ml 0,5 n sósavat, majd 12,5 ml 1 mólos nátrium-nitrit-oldatot adunk hozzá. 15 percig keverjük —10 C° körüli hőmérsékleten, majd 1,0 ml trietilaminnal semlegesítjük az oldatot, hígítjuk 250 ml hűtött kloroformmal és 2150 ml vízzel. A kloroformos fázis elválasztása után a vizes részt még mossuk kloroformmal, majd az egyesített kloroform-oldatokat mossuk hideg vízzel, szárítjuk magnéziumiszulfátön a kloroformos azid-oldatot az alábbi oldathoz öntjük: 7,5 tripeptid-brórnihidrátot (1. példa 14. lépés) feloldunk 17 ml dimetilforimlamidban és 4,62 ml trietilamin hozzáadása után egyesítjük a fenti azid-oldattal. A kloroformot vákuumban ledesztilláljuk és a reakicióelegyet állni hagyjuk szobahőmérsékleten két napig. A dimetilformamid ledesztillálása után a maradékot 250 g szililkagélből készült oszlopon krorniatograifáljuk etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60 : 10 : 3 : 5,5) elegyben. A tiszta védett pentapeptidet tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és 0 C° hőimérsékleten eldörzsöljülk 1 n sósavval, vízzel. A mosófolyadékot dekantálással távolítjuk el. A maradék sűrű olajat kloroformban oldjuk, magnéziumszulfáton szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A párlási maradékot éterrel eldörzsölvé 5,1 g (42%) védett pentapeptidet kapunlk. Rf1 0,45—0,95. [ifit]20 D = —19° (c=l, metanolban). C4 7H 77 0 : i e Ni5 (1108,211). Számított: C 51,6, H 6,95, N 18,9%. Talált: C 51,5, H 7,0, N 19,0%. 17 lépés: a) Z-LysiíBOCJiysCBOQ-ArgíNOaí-iArgiíNOa)-Pro-ONP* (15—19) 0,65 g védett pentapeptidet feloldunk 3,0 ml dimetilformamidban és előbb 0,082 ml trietilamint, <maj(d —10 C° hőmérsékleten 0,059 ml klórszénsaivetílésztert adunk hozzá. 10 percig 5 hűtés köziben állni hagyjuk, majd 0,24 g p-nitrofénolt adunk hozzá és szobahőmérsékleten állni hagyjuk éjszakán át. A dimetilfonmamidot ledesztáHáljiuk és a maradékot 14 g szilikagélből készített oszlopon kromatografál-10 juk kloroform-imetanol (9 : 1) eleggyel. A főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljük és éterrel eldörzsöljük. 0,47 g (65%) védett pentapeptid-p-nitrofenilésztert kapunk. Rf4 0,3—0,4. [a]~°D = —20° (c=l, 15 metanolban). CajHaAsNie (1229,30). Számított: OST 18,2%. 20 Talált: N 18,1%. b) Z-Lysi(BQC)-Lysi(BOC)^Arg(N02)-tArg(N02 )-Pro-OPCP (15—19) 25 4,0 ml dimetiliformamidiban feloldunk 1,62 g védett pentapeptidet, 0,45 g pentaklórfenolt (a pentaklórfenil gyök: PCP-) és 0,4 g diciklohexilkarbodiimidet. A reafccióeleigyet éjszakán át állni hagyjuk, a kivált diciklohexilfclarbaimi-30 dot kiszűrjük, a dimetilformamidot bepároljuk és éterrel eldörzsöljük és 1 ml kloroform-aceton-víz (40 : 40 : 1) elegyben feloldjuk, majd 50 g sziliikagélből készített oszlopon, á kloroform-aceton-víz eleggyel kromatografáljuk. Az 35 aktív észtert tisztán tartalmazó frakciókat öszszegyűjtjük, bepároljuk és éterrel eldörzisöljülk. 1,4 g (70%) anyagot kapunk. Rí* 0,55— 0,6S. Rf 0,45—0,55 ikloroform-aceton-víz (40 : : 40 : 1.0) rendszeriben. 40 C5 ,H7rA 6 N l5 Cl5 (1356,54). 45 50 Számított: N 15,4, Cl 13,05%. Talált: N 15,36, Cl 13,1%. 18. lépés: Z-Tyr(BuO-OSu <i2í3) *NP = p-nitrofenil 175 g finoman elporitott Z-Tyr(Bu')-OH-diciklohexilammóniuinsát 1 liter éteriben felszuszpend nálunk és 1250 ml víziben oldott 17,5 ml tömény kénsavval teljes oldódásig rázunk. '55 Az éteres oldatot szárítás után bepároljük, majd a visszamaradt olajat 625 ml vízmentes dioxánban oldjuk és jegesviz.es hűtés köziben 33,25 g N-hidroxiszukcinimidet és 66,7 g diciklohexilfcarbodiimidet adunk hozzá. Másnapig 60 szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált diciiklohexilkarbotnidot kiszűrjük, a dioxánt vákuumban ledeszitilláljuk és a visszamaradt olajat petroléterrel eldörzsöljiük. A nyers terméket 180 ml metanolból átkristályosítva 80 g 65 (54%) terméket kapunk. Op.: 118—120 C°. 6
