155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
7 155254 8 A maradék olajat feloldjuk 4 ml dimetilformamid'ban és az alábbi vegyes anhidridhez öntjük: 4,i5í5 g (4,84 mmól) védett heptapeptidet (i. példa 3. lépés) feloldunk 25 ml dimetilformamidban' és 0,67i5 ml (4,62 mmól) trietilamin hozzáadása után —30 C°-ra hűtjük. A hűtött oldathoz 0,49 ml (kb. 4,(9 mmól) klórszénsavetilésztert csepegtetünk, majd —20 C°-on keverjük 10 percig, ezután adjuk hozzá az aminokomponenst. Éjszakán át állni hagyjuk, majd 0,5 iml trietilamin hozzáadása után kb. 100 ml vízzel hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük, vízzel semlegesre mossuk, szárítjuk és éterrel is mossuk, végül 100 ml metanol — 70 ml víz elegyében forrón oldjuk, kristályosodni hagyjuk. Az anyagot szűrjük, .60%-os vizes metanollal mossuk és szárítjuk: 5,9 g (84%) védett dekapeptidet kapunk. Op.: 213—214 C°. Rf4 0,i2,3—'0,30, Rf3 0,28—0,35. CraHiosOisNii .(1440,66) 5. lépés: Z-AspíOBuO-Gln-Ser^Ala-GluiíOBuO-Ala-Phe-Pro-Leu~Glu(OBuO-Phe-OBu' ,(29—39) 200 ml dimetilformamidban feloldunk 6,48 g (4,5 mmól) védett dekapeptidet (1. példa 4. lépés) és 4,5 iml 1 n sósav hozzáadása után hidrogénezzük csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, éter-petroléterrel eldörzsöljük, éter-petroléter eleggyel, majd éterrel mossuk és szárítjuk: 5,62 g (87%). Rfs 0,12—0,23. A szabad dekapeptid-klórhidrátot (4,0)3 mmól) feloldjuk 12,6 ml dimetilformamidban és 0,565 ml (4,0)3 mmól) trietilamint, imajd 2,7 g (6,05 mmól) a-karbobenzoxi-yS-terc.butil-aszparaginsav-p-nitrofenilésztert adunk hozzá, s 40 órán át 50 C°-on állni hagyjuk. A reakcióelegyet éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és a nyers terméket 130 ml metanolban oldjuk, szenezzük, a szenet mossuk 26 ml forró metanollal, a metanolos oldatokat 10ö ml forró vízzel hígítjuk. A kivált anyagot szűrés és szárítás után mégegyszer átoldjuk 130 ml metanol és 100 ml víz elegyéből. Végül 4,9 g (75,5%) védett undekapeptidet kapunk. Op,: 211—213 C°. Rf3 0,4—0,45, Rf 4 0,27—0,33. C81 H 118 0 22 )N l2 (1611,65). 6. lépés: Z-GluíOBuO-AspíOBuO-Gln-Ser-Ala-Glu(OBuO-Ala-Phe-Pro-Leu-GlutOBuO-Phe-OBu' i(28—39) 4,6 g (2,85 mmól) védett undekapeptidet (1. példa 5. lépés) 250 ml 80%-os ecetsavban hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. 4,25 g (97%) szabad N-terminálisu undekapeptidet kapunk, melyet 2,1 g (4,5 mmól) a-karbobenzoxi-y-terc.butil-glutaminsav-p-nitrafenilészterrel reagáltatunk 10 ! rnl dimetilformamidban 50 C° hőmérsékleten 20 órán keresztül. A reakcióelegyet éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. A nyers-5 terméket 20 ml etilacetát-piridm-ecetsav-víz (60:10:3:5) eleggyel kifőzzük, majd jeges vízben hűtjük, a kivált géles anyagot szűrjük, 2x2 ml fenti eleggyel, majd éterrel mossuk és szárítjuk. 3,48 g (70%) védett dekapeptidet 10 kapunk. Op.: 201—203 C°. Rf3 0,46—0,53. Rf 4 0,47—0,52. C9 oH 133 0 25 N l3 (1797,07). 7. lépés: 15 Glu(OBuf )-Asp(OBu i )-Gln-Ser-1 Ala-Glu(OBuí )-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OBu f )--Phe-OBuf -HCl (28^39) 20 2,34 g (1,3 mmól) védett dekapeptidet (1. példa 6. lépés) 20 ml dimetilformamidban, mely 1,3 ml 1 n sósavat is tartalmaz, hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátorí kiszűrjük és az 25 oldatot bepároljuk, kb. 10 ml 15%-os konyhasóoldattal eldörzsöljük, szűrjük, kevés hideg vízzel mossuk és szárítjuk: 2,11 g (95,5%). Rf5 0,48—0,53. Rf4 0,06—0,15. C82 H 128 Q 2a N 13 Cl (1699,40). 30 8. lépés: Z-Ala-Gly-ONB* (26—27) "5 2,80 g (9,65 mmól) H-Gly-ONB • HBr-ot [H. Schwarz, K. Arakawa: J. Am. Chem. Soc. 8.1, 5691 (1959)] szuszpendálunk 5 ml víz és 15 ml etilacetát elegyében és 0 C°-on összerázzuk 15 ml hidegen telített kálium-karbonát oldattal. 40' Elválasztás után kirázzuk a vizes részt még kétszer etilacetáttal, az etilacetátos oldatokat egyesítjük, megszárítjuk és szobahőn vákuumban bepároljuk: 2,0 g (100%) kristályos szabad glicin-p-nitrobenziiésztert kapunk, amelyet 45 átkristályosítás nélkül felhasználhatunk. Ebből 2,0 g-ot (9,5 mmól) 2,13 g (9,5 mmól) karbobenzoxi-alaninnal együtt oldunk 20 ml metilénkloridban. Az oldatot 0 C°-ra hűtjük, és hozzáadunk 1,96 g (9,5 mmól) diciklahexil-karbodi-5<^ imidet 4 ml metilénkloridban oldva. Egy órán át 0 C°-on, egy órán át szobahőn. kevertetjük és éjszakán át állni hagyjuk. A dicikiohexilkarbamidot kiszűrjük: 2,0 g (94%), az oldatot m.ossuk híg sósavval, vízzel, 5%-os nátrium-55 -bikarboinát-oldattal, vízzel, megszárítjuk, bepároljuk. A maradékot kristályosítjuk 20 ml etilacetát — 20 ml petroléterből: 3,50 g. Űjra átkristályosítjuk metanol-vízből: 3,0 g (76%). Op.: 104—106 C°. Rf? 0,5—0,6. 60 C20 H 21 O 7 N a (415,3)96). Számított C 57,80, H 5,10, N 10,10%. Talált C 57,9, H 5,4, N 10,1 %• 65 *NB = p-rűtrobenzil. 4
