155243. lajstromszámú szabadalom • Fermentációs eljárás 9-(béta-D-arabinofuranozil)-adenin termelésére
155243 11 12 cenként 12 liter levegő bevezetésével keverjük. Ez idő alatt kb. 3'8 g mono- és diglicerideket tartalmazó lardolaj (disznózsírból préselt olaj) -ásványolaj keveréket adunk hozzá részletekben a nagyobb mértékű habzás meggátlására. 5 Négy darab 3'0 literes rozsdamentes acélból készült fermentorba beadagolunk egyenként 16 liter fenti összetételű tenyésztáptalajt, ezeknek a pH-ját minden egyes fermentorban 10 n nátriumihidroxid oldattal 7,5 értékre állítjuk be és io •mindegyiket 90 percig sterilizáljuk 121 C°-ra hevítve. Lehűlés után az egyes fermentorokban levő táptalajokat beoltjuk a fentiekben leírt fermentációs elegy 800 ml-nyi mennyiségével és mindegyiket 25—27 C°-on 96 órán keresztül 15 inkubáljuk, miközben 200 fordulat/perc sebességgel forgatjuk és percenként 16 liter levegő bevezetésével keverjük. Ez idő alatt a fentiekben leírt habzásgátló keverékből az egyes fermentorokban levő táptalajhoz adagokban mint- 20 egy 170 g-ot adunk. Ezután a négy fermentorból származó fermentációs elegyet egyesítjük és diatóma-föld segítségével szűrjük. Használhatunk pl. Celite 25 545 jelű anyagot. lA szűredéket csökkentett nyomáson 10 liter térfogatra betöményítjük és a koncentrátumot 200 g aktív szénnel (pl. Darco G—-60) kezeljük, szobahőmérsékleten egy órán 30 át keverjük és szűrjük. Az aktív szenes szűrési lepényt 7,5 liter vízzel mossuk, majd három ízben 10 literes részletekben 50%-os vizes acetonnal extraháljuk. A három vizes acetonos kivonatot egyesítjük, csökkentett nyomáson kb. %5 1 literre betöményítjük és 48 órán át 5 C°-ra hűtjük. A kivált szilárd '9-i(/?-<D-arabinofuranozil)-adenint elkülönítjük, majd forró metanolból és forró vízből egymás után végzett kristályosítással tisztítjuk; op. 2612—263 C°. 40 Ha a fenti eljárásban az inkubálás hőmérsékletét mindkét fermentációs fokozatban 25—27 C°-ról 36—38 C°-ira emeljük, termékül ugyancsak 9-i(^-D-arabinofuranozil)-adenimt kapunk, magasabb kitermeléssel. 2. példa: Tenyésztáptalajt készítünk, tétele a következő: melynek össze-Glukóz-monohidrát 2,0 % Oldószerrel extrahált szójaliszt (44% protein) 1,0 % Állati pepton {Wilson's Protopepton 159) 0,5 % Ammóniumklorid 0,2 % Nátriumklorid 0,5 % Kalciumkarbonát 0,25% Vízzel ilW/o-ra kiegészítve. 45 50 55 60 A táptalaj pH-ját 10 n nátriumhidroxid oldattal 7,5 értékre állítjuk be. A fenti táptalajból 38 litert (10 gallon) beadagolunk egy 1:13. literes :(30 gallon) rozsda- gg mentes acélból készült fermentorba. A táptalajt 60 .percig 121 C°-ra hevítve sterilizáljuk, lehűlni hagyjuk, majd 40 .ml spóraszuszpenzióval (melyet az 1. példa első bekezdésében leírt módon készítettünk) beoltjuk. Az elegyhez lardclajból és ásványolajból álló, mono- és diglicerideket tartalmazó habzásgátló keveréket (150 ml) adunk, i(pl. Swift's No. 51. Inedible Defoamer) és az egész elegyet 26—217 C°-on 59 órán keresztül inkubáljuk 190 liter/perc (6,25 köbláb/perc) levegőztetés közben. A -fentiekben leírt összetételű táptalajból 1135 litert (300 gallon) beadagolunk egy 1890 literes (500 gallon) „IncQneP'-burkolatú fermentorba. A táptalaj pH-ját 10 n vizes nátriumhidroxid oldattal 7,5 értékre állítjuk be, .majd 30 percig 121 C0 -ra hevítve sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalajt beoltjuk 38 liter .(10 gallon) fent leírt fermentációs keverékkel és az ugyancsak a fentiekben leírt habzásgátló keverékből kb. 1000 ml-t adunk hozzá, majd az elegyet 24—25,5 C°-on ,24 óráig 84 iford./perc sebességgel történő mozgatással és 1370 liter/perc i(45 közláb/perc) levegőztetéssel keverve inkubáljuk. Ez idő alatt további 5:13 ml habzásgátló keveréket adunk hozzá adagokban. Két darab egyenként 7570 literes (2000 gallon) „Inconel'-burkolatú fermentorba beadagolunk 4540—4540 liter (1200 gallon) fent leírt összetételű tenyésztáptalajt. A táptalaj pH-ját mindegyik fermentorban 10 n vizes nátriumhidroxid oldat hozzáadásával 7,5 értékre beállítjuk, majd a táptalajokat 30 percig 121 iC°-ra hevítve sterilizáljuk. Lehűlés után mindegyiket beoltjuk 568 liter .(150 gallon) az előző bekezdésben leírt fermentációs eleggyel, mindegyikhez hozzáadunk 10: —ilO liter habzásgátló keveréket és 24,5^2,6,5 C°-on 95 órán át 1:25 íord./perc sebességgel történő mozgatással és 3i650 liter/perc (120 köbláb/perc) levegőztetéssel keverve inkubáljuk. Ez idő alatt további 40—46 liter habzásgátló adalékot adunk hozzá, szükség szerint. A két fermentorból származó fermentációs elegyet egyesítjük, az elegy pH-ját 10 n vizes nátriumhidroxid oldattal 7,2 értékre beállítjuk, 136 kg (300 pound) diatóma-földdel feliszapoljuk és szűrjük. A szűredéket csökkentett nyomáson 1890 liter i(500 gallon) térfogatra betöményítjük és a koncentrátumot 37,5 kg (87 pound) aktív szénnel kezeljük, szobahőmérsékleten egy órán át keverjük és szűrjük. Az aktív szenes szűrési lepényt 1515 liter (400 gallon) vízzel mossuk, majd három ízben egyenként 1890 liter (500 gallon) 50%-os vizes acetonnal kivonatoljuk. A három vizes-acetonos kivonatot egyesítjük, majd csökkentett nyomáson 170 liter (45 gallon) térfogatra bepároljuk és 48 órán át 5 C°-ra lehűtjük. A kivált szilárd 9-i(/3-D-arabinofuranozil)-adenint elkülönítjük és egymást követően metanolból és vízből kristályosítjuk, op. 282—263 C°. A fenti eljárásban a 9H(/M3-arabinofuranozil)-adenint jobb kitermeléssel kapjuk, ha az in-6
