155100. lajstromszámú szabadalom • Eljárás virulens Propionibacterium oltóanyag előállítására

155100 6 a) Az 500 ml-es Erlenmeyer lombikban kifejlődött tenyészetet — steril körülmények között — kémcsövekbe szétosztjuk 15 ml-ként (3% glicerinnel elegyítve) és lefagyasztjuk —2,0 és —30 C° közötti hőmérsékleten, majd —10 C° alatti hőmérsékleten tároljuk. A fagyasztott tenyészetekből 8—12 hónapig olthatunk be fenti összetételű folyékony táptalajt. b) Az 500 ml-es Erlenmeyer lombikban kifejlődött tenyészetet közvetlenül, tehát fagyasztás nélkül átolthatjuk 2 liter, fenti öszszetételű folyékony táptalajba, amit 4—6 napos, anaerob, 30 C°-on való tenyésztés után átoltunk 1 m3

táptalajt tartalmazó inokulum készülékbe. A laboratóriumban az a) vagy a b) módszerrel előállított 2 liter Propionibacterium shermanii 104/b oltóanyagot beoltjuk a következő összetételű 1 m3

inokulum táptalajba: kukoricalekvár (sz.a.) 1,00 % glukóz 3,00 % ammóniumszulfát 0,30 % kalciumpantotenát 0,003P/0 pH: 6,8—7,0, sterilezés után, a steril nátriumkarbonát oldattal beállítva. A fermentálást anaerob körülmények között folytatjuk 36—40 óráig, 30 C°-on, s a pH-t 6,8—7,0-re korrigál-10 juk 4 óránként. A fermentáció 36—40-dik órájában 1 mg/1 mennyiségű 5,6-dimetilbenzimidazolt adagolunk a fermentléhez, s ezután intenzív levegőztetés mellett folytatjuk a fermentálást, 8—12 óra hosszat. 44—52 óra között 15 befejezzük a fermentálást és meghatározzuk kémiai módszerrel a termelt ossz B12

vitamin mennyiségét: 17,8 mg/l. 2. Az 1. példa szerint előállított 12 m3

oltó-20 anyaggal a következő összetételű fermentációs kukoricalekvár (sz.a.) 3,00% táptalajt oltjuk be (40 m3

): glukóz 2,00% ammóniumszulfát 0,30% kukoricalekvár 1,00 % magnéziumkarbonát 1,00% glukóz 3,00 o/0 pH: 6,3—7,0, sterilizálás után. 25 kalciumpantotenát 0,002% A baktérium szaporodását nefelometriás mérésekkel követjük. A harmadik nap a tenyészet eléri a 400—480% nefelometriás méréssel mért zavarosságot. A tenyészet pH-ja 6,2—6,5, ekkor alkalmas a továbboltásra, a nyert oltóanyag virulens. Az előállított 1 m3

virulens inokulumot a következő összetételű, 12 m3

táptalajt tartalmazó fermentorba oltjuk: kukoricalekvár (sz.a.) 2,00% glukóz 2,00% ammóniumszulfát 0,30% pH: 6,8—7,0 sterilizálás után és steril nátriumkarbonát oldattal beállítva. A fermentálást 30 C°-on folytatjuk le, de 4 óránként a fermentlé pH-ját steril nátriumkarbonát oldattal 6,8—7,0 pH-értékre korrigáljuk. A tenyésztést 38—42 óráig folytatjuk, ekkor a tenyészet eléri a 350—450% nefelometriás méréssel mért zavarosságot, mely alkalmas a továbboltásra. A 40 m3

fermentációs táptalaj összetétele a következő: 30 35 40 45 50 pH: 6,8—7,0, sterilezés után és ammóniumhidroxid oldattal beállítva. A fermentálást anaerob körülmények között folytatjuk 36—40 óráig, 30 C°-on, s a pH-t 6,8—7,0-re korrigáljuk 4 óránként ammóniumhidroxid oldattal. A fermentáció 316—40-ik órájában 1 mg/l mennyiségű 5,6-dimetilbenzimidazolt adagolunk a fermentléhez, s ezután intenzív levegőztetés mellett folytatjuk a fermentálást, 8—12 óra hosszat. A fermentáció befej eztekor a termelt ossz B12

vitamin menynyisége 17,0 mg/l. Szabadalmi igénypont: Eljárás kobalaminok fermentációjához alkalmazható propionibacterium-oltóanyag előállítására azzal jellemezve, hogy virulens-oltóanyagot állítunk elő oly módon, hogy propionbaeterium törzset 0,5—2% magnéziumkarbonátot tartalmazó szilárd vagy folyékony táptalajon inkubálunk anaerob körülmények között. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6808142. Zrinyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 3