155081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az enduracidin antibiotikum előállítására

155081 19 20 A példákban megadott hőmérsékleti adatok Celsius-fokokban értendők, a százalék-értékek — amennyiben más nincsen megadva — súly/ /tf.%-iban értendők. 5 •1. példa: A Streptoimyces funigieidicus B—5477 glükóz-aszparaginos ágár-lemfezen tenyésztett ferde kultúrájáról egy platinakíacsnyi mennyiséget io beoltunk kétliteres lombikokba helyezett vizes tápköziegek 500—600 miijébe; e vizes tápközegek összetétele: 2% glükóz, 3% keményítő, 1% kulkoíiiaalekvár, 1% szórjaliszt, 0,5% pepton, 0,3% nátriumklorid és 0,5% kaloiumkar- 15 bonát; a közeget előzetesen 7 pH-értékre állítjuk be és 20 percig sterilizáljuk 120 C° hőmérsékleten nagynyomású vízgőzzel. Beoltás után a kultúrákat 28 C° hőmérsékleten 24 óra hosszait inkubáltatjuk rázás köziben (120 for- 20 dulat/perc, 10 cm lö'fcetlhoísszal). A kapott kultúra 1 literjét átoltjuk 30' liter ugyanilyen összetételű táptalajra, amelyet egy 50 literes tartályban tartunk és 28 C° hőmérsékleten keverés (percenkint 280 fordulat) és 25 szellőzés (percenkint 45 liter levegővel) közben 24 óira hosszat inkubáltatjuk. Az így kapott előkultúrát azután 500 liter vizes tápközegre oltjuk át, amelynek összetétele: 1% glükóz, 2% keményítő, 1% kukorica- 30 lekvár, 1% szójaliszt, 0,5% pepton, 0,3% nátriuimkloríd és 0,15% kaleiumkiarboínát. Ezt a tápközeget egy rozsdamentes acélból készült 1000 literes tartályban tartjuk és 96 óra hoszszat, 28 C° hőmérsékleten inkubáltatjuk, ke- 35 verés (percenkint 180 fordulat) és szellőzés (az inikulbálási idő első felében percenkint 750 liter, a .második feléiben pedig percenkint 500 liter levegővel) közben; ibaibzásgátlóként fcb. 1,5 kg szilikon-olajat alkalmazunk. 40 Az infaibáltatás folyamán vett mintákkal meglhaMroztuk a közeg pH-értéklének. változásait és az antiibakteriális aktivitás alakulását (ez utóbbit ágár-lhígításois módszerrel). A kapott eredményeket az alábbi táblázatban fog- 45 laltuk össze: 50 Fermentációs Kultúraidőszak pH -szűredék Micehum (óira) St B St B Sakaguehipalack i(iinoíkulum) 6,15 —• — — — Élőkultúra ;(30 literes) 7,05 .— — — — i0 7,05 —• — — — 18 6,28 — — — — 24 6,70 — — — — 500' literes kultúra 7,06 — — — — 0 7,05 — — — — 18 i6,:75 — — — — 30 7,16 10> 10> íl0> 10 — — 55 60 Fermentációs Kultúraidőszak pH -szűredék Miceuum (óra) St B St B 42 7,36 10<> 10> 20 20 54 7,55 35 1315 350 350 66 7,70 50 150 350 350 78 8,05 715 75 7501 750 90 8,03 100 100 1000 1O0.0 Jelmagyarázat: St = Staphylo coccus aureus B = Bacillus sulbtilis 2. példa: Az 1. példa szerinti módon kitenyésztett 1 liter inokulum-kultúriát fbeoltunk 30 liter alábbi összetételű vizes táptalajba: 2% glükóz, 3% keményítő, 1% kukoricalekvár, 1% szójaliszt, 0,5% pepton, 0,3% nátriumklorid, 0,5% kaleiumkaíbonát és 0,2% nátriumglutarnái; a beoltott tápközeget azután 28 C° hőmérsékleten 9i6—I'2i0 óira hosszat inkubáltatjuk, keverés (percenkint 280 fordulattal) és szellőzés (percenkint 45 liter levegővel) mellett, sziiikon-ol'aj halbzásgátló szerként való hozzáadásával. Az inkubációs idő folyaimán kivett mintákkal ellenőriztük a pH-érték és az antimikroibdá'lis aktivitás változásait '(utóbbit ágár-ihígítási módszerrel). A kapott eredményeket az alábbi táblázatiban foglaltuk össze: Fermentációs időszak (óra) pH Kultúra-St b Mioélium -szűredék St h 0 18 30 42 54 66 78 00 102 114 7,25 6,95 6,81 7,00 7,30 7,52 7,62 7,59 7,70 7.90 10> 10> Í10> 10> 10> 10> 10> io> 35 30 150 150 35 20 150 150 35 35 350 350 500 500 1500 1500 500 500' 2000 2000 500 500 20OO 2000 65 3. példa: Az 1. példa szerinti módon kapott 500 liter fermentációs levet leszűrjük, és így 100 kg nedves mieéliuimot választunk el a 400 liter fcultúra-szűredéktől. A nedves midéliumot 300— 300 liter 70%-os vizes aeetonntal kétszer extraháljuk keverés köziben, 3'—3 óra hosszat. Az acetonos kivonatokat egyesítjük; az így kapott acetonos oldat St. aureus mikroorganizmussal szemben 200—360 E/mm aktivitást mutat. Ezt az acetonos oldatot 4 n kénsavoldattal 5—6 10