155081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az enduracidin antibiotikum előállítására

155081 23 24 oldunk, majd egy 5 ,ml Amlberlite IR—45 ioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon folyatjuk keresztül az oldatot. Az oszlopot metanollal eluáljulk. Az eluátumot betöroányítjjüik és a kapott konoentrátumot fagyasztva szárítjuk. A 5 kapott terméket aceton és éter elegyével mossuk:; ily módon 80 mg terméket kapunk fehér por alakjában (szabad vegyület). Ez a termiek St. aureus mikroorganizmussal szemlben 15 OOO E/mg antimilkrobiális aktivitást io mutat. 6. példa: 16 liter fermentációs levet, amelyet az 1. 15 példáiban leírthoz hasonló módon nyertünk, leszűrünk és így klb. 4 kg nedves micéliumot különítünk el. Ezt a micéliumot fcb. 2 pH-nál négyszer extraháljuk egyenlő térfogatú 70%-os vizes acetonnal, 3 órai keverés útján. A 18 li- 2ü ter vizes aoetonos kivonatot, amely St. aureussal szemben 3500 E/iml aktivitást mutat, nátriumhidroxiddal 8,8 pH-ra állítjuk és 180 g aktívszenet, valamint 160 g Hyflo Supercel szűroanyagot adunk hozzá, majd az egészet 25 1 óra hosszat keverjük. Ezután leszűrjük, a szűrőn .maradt aktívszenet tízszeres térfogatú acetonníal mossuk, majd tízszeres térfogatú metanollal megismételjük a mosást (a mosótfoilyadék tízszeres térfogatát a szűredék térfogatára so számítva). A fenti módon kezelt aktívszenet azután húszszoros térfogatú (az aktívszén térfogatára számítva) savas vizes acetonnal kétszer extraháljuk 3'—3 órai keveréssel. A savas vizes aoetonos kivonatokat egyesít- 35 jük és 5 pH-értékre állítjuk be, majd a szerves oldószert elpárologtatjuk oly módon, hogy maradékként 1,5 liter vizes oldatot kapjunk. Ezt az oldatot egy 200 ml Amberilite IR—120 gyantával (H^alakibán) töltött oszlopon, majd 40 egy 200 ml Amibarlite IR—45 gyantával töltött oszlopon vezetjük keresztül, azután az így kezelt oldatból az oldószer csökkentett nyomás alatt ledesztilláljiuk. A maradékhoz 5 liter vizet adunk, a pH-értéket 8,5-re állítjuk be, 45 majd 1/3—1/3' tf. n-JbutanoIlal háromszor extraháljuik. A butanolos kivonatokat egyesítjük, vízzel mossuk és csökkentett nyomás alatt betöményítjük, köziben vizet adva hozzá, hogy 500 ml vizes n-lbutanolos oldatot kapjuník ma- 50 radékként. Ehhez az oldathoz 5 liter étert adunk, a képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük és megszárítjuk; ily módon 4 g nyers por al'akú enduracidint kapunk. Ez a nyers termék St. aureus mikirooirganiz- 55 mussal szemben 10 OOO E/mg aktivitást mutat. 7. példa: Két 2 literes lombikba 500—500 ml alábbi 60 összetételű tápközeget viszünk be: 2% glükóz, 3,5% kukorieálelkvár, 1,5% kalciumkarbonát és víz. Ezt a tápközeget beoltjuk Streptomyces fungicidicus B—'5477 (IFO—'12440 (ATGC—211014) mutáns törzssel és 28 C° hőmérsékleten 2 napig inkiubáltíatjuk irázóasztalon, előinokulum előállítása céljából. Egy 50 literes tartályba 30 liter alábbi öszszetétélű vizes tápközeget viszünk be: 2,% glüíkóz, 3% oldható keményítő, 1% kukoricalekvár, 1% szójialiszt, 0,3% nátriumíklorid, 0,5% pepton, 0,5% kalciumkarbonát; pH-érték 7,0-ra beállítva. Ezt a tápíközeget beoltjuk a fenti módon előállított előinolkulummal, majd 26 C° hőmérsékleten, percenkint 30 liter levegővel szellőzve infcubáltatjdk. A közeg pH-értékének és antibiotikus aktivitásának a 90 órai inkubációs időszak folyamán való alakulását az alábbi táblázat adatai mutatják: Inkubációs A közeg A teljes közeg antibiotikus idő (óra) pH-értéke aktivitása (E/ml) 0 7,05 <!10 18 7,00 <10 30 7,10 <10 42 7,3,5 50 54 7,i82 350 66 7,82, 1000 78 7,34 1500 90 7,34 1500 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az enduracidin antibiotikum előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, a Streptomyces fajhoz tartozó, enduracidint termelő törzset egy asszimilálható széniforrást, asszimilálható nitrogénforrást és egyéb, a mikroorganizmusok fejlőidléséhez szükséges tápanyagokat tartalmazó közegben 20—45 C° körüli hőmérsékleten, 40—240 óra hosszat aerob körülmények között tenyésztünk, .majd a felgyülemlett enduracidint kinyerjük a közegiből. (Elsőbbsége 1965. október 13.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy enduraciidin-termélő törzsként a Streptomyces fungieidus B—©477 variáns törzset alkalmazzuk. (Elsőbbsége 1965. október 13.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy enduracidin-termelő törzsként a Streptomyces fungicidícus B—5477 törzs ATCC—31014 mutánsát alkalmazzuk. (Elsőbbsége: 1966. október 13.) 5 rajz, 6 ábra A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 12 6807780. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.