154860. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 15-helyzetben oxigénatommal, hidroxil-, aciloxi- vagy alkoxi-csoporttal helyettesített 9béta,10alfa-szteroidok előállítására
7 154860 8 resztülvihető ecetsavban oldott krómsavval és egyéb enyhe hatású oxidálószerekkel, úm. krómtrioxiddal, kálium-, nátrium- vagy ammóniumfoikrornáttal, káliumpermanganáttal, mindig savas oldatban. A találmány szerinti vegyületeket szokásos módon gyógyszerészeti készítményekké, pl. tablettákká, injekciós folyadékokká, kúpokká stb. dolgozhatjuk fél. Példák: Az alábbi példákban 20—20-as és 5—5-ös táptalajokat alkalmaztunk. A 20—20-as táptalajt az alábbi módon készítettük: Egy csapvízből álló táptalajt, melyben literenként 20 g kukoricalekvárt (szilárdanyag-tartalom), 20 g glükózt és annyi nátriumhidroxidot oldottunk, hogy a pH értéke 6,5 volt, 20 percig 120 C°-on sterilizáltuk. Az 5—5-ös táptalajt az előzőkhöz hasonló módon készítettük, azzal a különbséggel, hogy ez 20 g kukoricalekvár és 20 g glükóz helyett csupán 5—5 g-ot tartalmazott a komponensekből. 1. példa: 9/j,10a-pregnj 4-en-3,20-dion átalakítása Aspergillus ochraceus NRRL 405 segítségével. A törzset a Northern Regional Research Laboratory '(Peoria 111.) szállította; azt zab-glükóz-agaron tartottuk, .melyen néhány nap alatt bőven képzett spórákat. Oltólombikok, melyek mindegyike 500 ml steril 20—20-as táptalajt tartalmaz, közvetlenül a törzzsel beolthatok és 48 órai rázás után újra beolthatok. Három lombik tartalmával oltjuk be az oltótartályt, melyben 70 liter 20—20-as táptalaj van. Ezt 406 ford/perc sebességgel keverjük. A tartály bruttó térfogata 100 liter és azon percenként 95 liter levegőt vezetünk át; 24 óra múlva az oltóanyag elkészül és abból 30 litert használunk fel 2200 liter steril 5—5-ös táptalaj beoltására, amely 4000 literes tartályban van. A kultúrát 140 fordulat/perc sebességgel keverjük és azon percenként 1500 liter levegőt vezetünk át. A hőmérséklet 30 !C°. A .beoltass után 24 órával elegendő micéliunnmennyiség képződik a kultúrában és az átalakítandó szteroid, vagyis 333,3 g 9ß,10£Hpregn-4-en-3,20-dion 26 liter 96%-os alkoholban oldva hozzáadagolható. Ezután a fermentációt az említett körülmények között folytatjuk. 42 óra múlva a szufosztrátum teljesen átalakult lla-foidroxi-9/?,.10!a-pregn-4-~en-3,20-dk>nná és néhány egyéb melléktermékké. A micélium szűréssel való eltávolítása után a kultúra szűredékét háromszor 1/5 térfogatnyi metilizofoutilketonnal extraháljuk. A kivonatokat vákuumban 66 literre besűrítjük és 300 g aktívszénnel kezeljük. Az oldatot vákuumban kb. 2 literre bepároljuk, miáltal 630 g nyers kristályos terméket izolálunk. Az anyalúgot nátriumnidroxidos vízzel mossuk, vákuumban bepároljuk, míg égy szárazmaradékot nyerünk, mely többszöri kristályosítás után további 150 g nyers kristályt ad. Összesen 735 g nyers terméket kapunk, amely csekély melléktermékkel szennyezett lloHhidroxi-9/?,;10a-pregri-4-en-3,20-dion. A terméknek egy részét, még pedig 446 g-ot ismételt kristályosítással szétválasztunk. 5 a) 400 g ll.a-hidroxi-J9/ S,.10a-pregn-4-en-3,:20--dionira, op. 224,5-r<227,5 C°, [a]D —36°, (c=l, kloroform); IR-spektrum: 3615, 1700, 1662, 1612 cm""1 (kloroform); b) 0,87 g 15ia-hidroxi-9ß,10a-pregn-4-en-3,20-10 -dionra, op. 202—20:6 C°, [a]D ^23,2°, (C = l, kloroform), UV„!ax 242 írni .(£=16,200, metanol); IR-spektrum (kloroform): 3620, 1705, 1665, 1614 cm-1 . 16 2. példa: 9/J,10GHpregn-4~en-3,20-dion átalakítása Colletotrichum gloeosporioides segítségével. 20 A 9#,li0«Hpregn-4-en-3,20-diont a Colletotrichum gloeosporioides Pnz.Stíb.Nolla segítségével alakítjuk át 15«-hidroxi-^9/í,,10!a-pregn-4-en-3,20--dionná. Ezt a törzset a „Central Bureau voor Sohi,mmelcultures"-től (BAARN Hollandia) sze-25 reztük be és zab-agaron tartjuk. Az agáron jól kifejlődött kultúra részeit 8 db kétliteres oltólombikba juttatjuk, melyek 500—500 ml 20—20-as táptalajt tartalmaznak. Miután a lombikokat 26 C°-on három napig ráztuk, elegendő micé-30 liummennyiség képződik, úgyhogy át lehet térni a fő fermentációra. Ezt 100 liter térfogatú tartályban végezzük, amely 60 liter 5—5-ös táptalajt tartalmaz. A fermentáció folyamán 140 fordulat/perc sebességgel keverjük az anya-35 got és azon óránként 3500 liter steril levegőt vezetünk át. A szteroidot, nevezetesen 8 g 9/?,10ö;-pregn-4-en-i3,20-diont az oltás után 24 órával adagoljuk a tartályba. A szteroidot 500 ml acetonban oldjuk. A fermentációt az emlí-40 tett körülmények között 26 C°-on végezzük. 50 óra után a .szufosztrátum ,15«-hidroxi-9^,10,a-pregn-4-en-3,,20-dionná alakul át. Miután a micéliumot leszűrjük, a kultúra 45 szűredékét .1/5 térfogatnyi metilizofoutilketonnal háromszor extraháljuk. A kivonatot vákuumban 2 literre betöményítjük, nátriumhidroxid-tartalmú vízzel mossuk és vákuumban .25 ml-re besűrítjük. Így 3,26 g kristályos termé-50 ket kapunk. Az anyalúgból szárazra párolással és aceton-heptán elegyből való kristályosítással még 0,3 g kristályos terméket nyerünk. Az egész terméket aeeton-heptán elegyből, kétszer metanol-55 -víz-elegybő! és végül benzolból átkristályosítjuk. Kitermelés: 242 g lSa-foidroxi-g/J.lüa^pregn-4-en-3,20-dion. Op. 203—4205 C°, [a]D —23,2°, (C = l, kloroform). 60 UVmax 242 mjn, s = 16,200 (metanol). IR-spektrum (kloroform): 3820, 1705, 1665, 1615 cm-1 . Analízis: C = 76,36%, H=9,12% (C21 H 30 O 3 ra elméleti: C = 76,32%,, H=9,15%). 65 A termék egy részét ecetsavanhidrid-piridin 4
