154813. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy terakozapeptid előállítására
5 154813 3 még más, gyógyászatilag értékes anyagok is jelen lehetnek. Az új vegyület, akárcsak a természetes ACTH, depokészítményként is alkalmazható. A találmány szerinti eljárással előállított tetrakozapeptid-származék és sói közbülső termékként is felhasználhatók gyógyszerészeti készítmények előállítására. Az új tetrakozapeptid-származék felépítése során a lizinmaradék s-aminocsoportjának blokkolására a karbo-tercfoutoxi- és karbo-terc.amiloxicsoport vált be, de más alkalmas védőcsoportok, mint a karbobenz" oxi-, toluolszulfonil-, ftalil-, formil- és trifluoracetil-csaportok is használhatók. A hisztidinmaradék imidazolcsaportjának blokkolására a trifenilmetilcsoport vált be, de más alkalmas védöcsoportok, mint pl. a karbo-terc.butoxi-, karbo-tere.amiloxi-, karbobenzoxivagy benzilcsoportok is használhatók. Az argininmaradék guanidocsoportjának blokkolására a nitrocsoportot használhatjuk, de más alkalmas védőcsoportok, mint például a tozil-, p-nitrokarfoobenzoxi- vagy 2-(izopropiloxikarbonil)-3,4,5,6-tetraklórbenzoilcsoport is alkalmas. Kihasználhatjuk a szintézisnél a guanidicsoport protonálásának védőhatását is. A következő rövidítéseket alkalmazzuk: CBO karbobenzoxi Trit tritil = trifemlmetil CTB karbo-terc.butiloxi N02 nitro OCP 2,4,5-triklórfenoxi OTB terc.butoxi OMe metoxi OEt etoxi Arg L-arginil Glu L-glutamil Gly glicil His L-hisztidil Lys L-lizil Nie L-Jiorleucil Ehe L-fenilalanil Pro L^prolil Prop propionil Ser L-szeril Try L-triptofanil Tyr L-tirozil Val L-valil Im imidazolil 10 15 A glutaminsavmaradék ^-karboxilicsoportjának blokkolására a terc.butiloxicsoport vált be, de más alkalmas védőcsoportok, mint pl. a metoxi-, etoxi-, tercamiloxi-, amid- és benzil- 20 oxicsoportok is használhatók. 25 30 ?5 40 45 50 55 60 Az alábbi példákban, amelyek az eljárás végrehajtását szemléltetik, a találmány terjedelmét azonban semmiképpen sem korlátozzák, a hőmérsékleteket Celsius-fokokban adjuk meg. gs 1. példa: L-valil-glicil-karbo-terc.hutoxi-L-lizil-karbo-terc.butoxi-L-lizil-L-arginil-L-arginil-L^prolil-L-valil-karbo-terc.butoxi-L-lizil-LHvalil-L-tirozil-L-prolil-L-valinamid [H-Val-Gly-(CTB)Lys-,(CTB)Lys-Arg-Arg-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro~Val-NH2 ]. 88 g CBO-'(N02 )Arg-{N0 2 )Arg-Pro-OMe-t feloldunk 90%-os dioxán-víz elegyben, és hozzáadunk 220 ml 2 n nátronlúgot. 2 óra elmúltával 1 liter vízzel hígítjuk, és többször etilaoetáttal kimossuk. Ezután a vizes oldatot 4 n sósavval megsavanyítjuk, a kicsapódott terméket feloldjuk 1 : 1 arányú metanol-aeeton elegyben, és etiléterrel kicsapjuk. 70 g CBO-(NQ2 )ArgH(N02 )Arg-Pro-OH-t kapunk, amely bomlás közben 10i8°-on olvad. [<X]D = —19° dimetilformamidban. A kapott tripeptidet feloldjuk 400 ml 33% hidrogénbromidot tartalmazó jégecetben, 1 - óra hosszat 20°-on állni hagyjuk, 200 ml-re koncentráljuk, etiléterrel kicsapjuk, szűrjük, etilacetáttal mossuk, és megszárítjuk. 72 g H-(N02 )Arg-(N0 2 )Arg-Pro-OH-3 HBr-t kapunk, amely bomlás közben 84°-on olvad. [a]21 D = = —19° 95%-os ecetsavban. 72 g H-(N02 )Arg-(N02 )Arg-Pro-OH • 3 HBr-nak 600 ml dimetilformamiddal és 56 ml trietilaminnal készült oldatába 0°-on 84 g CBO-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-N3 -t (85 g megfelelő hidrazidból előállítva) viszünk be. Az oldatot 16 óra hosszat állni hagyjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk. A maradványt feloldjuk n-hutanol és etilacetát 2 : 8 arányú elegyében, és többször híg kénsavval utánamossuk. Az oldatot vákuumban bepároljuk, és éterrel kicsapjuk a terméket. 90 g CBO-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(N02 )Arg-i(N02 )Arg-Pro-OH-t kapunk, amely bomlás közben 151°-on olvad. [a]D = —-38° metanolban. 56 g CBO-Val-Gly-(CTB)LysH(CTB)Lys-(N02 )Arg-(N02 )Arg-Pro-OH-t feloldunk 900 ml dimetilformamidban és 900 ml tetrahidrofuránban. 6,2 ml trietilamin hozzáadása után az oldatot —10°-ra hűtjük, és ezen a hőmérsékleten hozzáadunk 4,2 ml klórhangyasavetilésztert. 10 perc elmúltával hozzáadunk 36 g H-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 -ot 160 ml dimetilfoirmamidibiain, és 16 óira hosszait 20°-on keverjük. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, és a maradványt vízzel kimossuk. A peptide! forró etanolban oldjuk, és etilacetáttal kicsapjuk. Leszívatás és szárítás után 72 g CBO-Val-Gly-(CTB)LysH(CTB)Lys-(N02 )Arg^(N0 2 )Arg-Pro-Val-,(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2-ot kapunk, amely bomlás közben 190°-on olvad. [O\D = —36° dimetilformamidban. 72 g CBO-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(N02 )Aíg-(N02 )Arg-Pro-Val-!(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 ^ot feloldunk 1,5 liter 80%-os ecetsavban, hozzáadunk palládiumot katalizátorként, a hidrogénfelvétel megszűntéig hidrogénezzük, és a katalizátortól szűréssel elválasztjuk. Bepárlás után a maradványt 500 ml metanolban 3
