154812. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy pentakozapeptid előállítására
11 154812 12 56 g CBO-Val-Gly-<CTB)Lys-(CTB)Lys-(N0 2)ArgH(N02)Arg-Pro-OH-t feloldunk 900 ml dimetiMonmaimidban és 900 ml tetrahidrofuránban. 6,2 ml trietilamin hozzáadása után az oldatot —'10°-ra hűtjük, és ezen a hőm érseki éten hozzáadunk 4,2 iml klórhangyasavetilésztert. 10 perc elmúltával hozzáadunk 36 g H-ValH(CTB)Lys-Val-Ty,r-Pro-Val-iNH2-ot 160 ml dimetilformamidban, és 18 óra hosszat 20°-on keverjük. Az oldószert vákuumiban elpárologtatjuk, és a maradványt vízzel kimossuk. A peptidet forró etanolban oldjuk, és etilacetáttal kicsapjuk. Leszívatás és szárítás után 72 g CBO-Val-Gly-j(CTB)Lys-.(CTB)Lys-(iN02)Arg-(N02 )Arg-Pro-Val-<CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 -ot kapunk, aimely bomlás közben 190°-on olvad. [Ö]D = = —36° dimetilformamidban. 72 g CBO-Val-Gly-.{CTB)Lys-(CTB)Lys-l (N0 2 )Arg-í(NO2 )Arg-Pro-Val-í(CTB)Lys-Val-Tyr-Pr0--Val-!NH2 -ot feloldunk 1,5 liter 80%-os ecetsavban, hozzáadunk palládiumot katalizátorkánt, a hidrogénfelvétel megszűntéig hidrogénezzük, és a katalizátortól szűréssel elválasztjuk. Bepárlás után a maradványt 500 ml metanolban oldjuk, —S°-ra hűtjük, hozzáadunk 4,1 g p-toluolszulfonsavat, és végül éterrel kicsapjuk. 66 g H-Val-Gly-(CTB)Lys-:(CTB)LysnArg-Arg-Pro-Val-H(CTB)Lys-V:al-Tyr-Pro4Vial-iNH2 -Trit-toluolszulfonátot kapunk,amely bomlás közben 185°-oh olvad. [a]20 o == —42° dimetilformaimidban. 2. példa: 0-terc.-ibutil-L-glutamil-Im4ritil-L-(hisztidil-L•jfenilalanil-L-arginil-L-triptofanil-glicil-N•Jkarbo-terc.butoxi-L-lizil-L-prolil-L-valil-glicil-N-karho-teirc.'butoxi-L-lizil^N-karbo-terc.lbutoxi-L-lizil-L-airginil-L-arginil-LHprolil-L-valil-NHkarbo-ter'CJbutoxi-L-lizil-L-valil-L-^irozil-L-prolil-L-valinamid (H-(OTB)Glu-'(Trit)His-Phe-Arg-Try-Gly-)(CTB)Lys-Pro-Val-Gly-(CTB)Lys(CTB)Lys-Airg-Arg-Pro-VaHCTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 ). 62 g H-Val-Gly-<(CTB)Lys-(CTB)Lys-Arg-Arg-Pro-Val-i(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 • 3 Tos-OH-t feloldunk 300 ml piridinben és 300 ml acetonitrilben. Ezután hozzáadunk 57 g Trit-(OTB)Glu-l(Trit)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-OH-t, és mikor minden feloldódott, 0°ra hűtjük, és hozzáadunk 28,6 g diciklohexilkarbodiimidet. 24 órai rázás után 20°-on a karbamidot leszűrjük, és az oldatot éterrel kicsapjuk. A terméket ismételten metanolban oldjuk, és etilacetáttal kicsapjuk. 90 g Trit-(OTB)Glu-(Tírit>His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-Val-Gly-i(CTB)Lys-'(CTB)Lys--Arg-Arg-Pro-VaHCTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 -tritoluolszulfonátot kapunk, amely bomlás közben 184°-on olvad. [a]20 D= — J 51° metanolban. 45 g Tirit-.(OTB)Glu^(Trit)His-Bhe-Arg-Try-Gly-j(CTB)Lys-«Pro-Val-Gly-i(CTB)Lys^(CTB)Lys-Arg-Arg-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 -3 Tos-OH-t feloldunik 5O0 ml 80%-os ecetsavban és 2 óra hosszat 30°-on állni hagyjuk. Hozzáadunk 50 ml acetátfázisú Arríberlit ERA— 410-et, leszűrjük, a szűredéket vákuumban bepároljuk, és a maradványt metanolban oldjuk. 5 Éterrel kicsapva 40 g H-i(OTB)Glu-(Trit)His-Fhe^Arg-Try-Gly-<(CTB)Lys-Pro-Val-Gly-(CTB)Lys-'(CTB)Lys-Arg-Arg-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 -t kapunk, amely 170°-on elbomlik. [O]20 D =—49° metanolban. 10 3. példa: L-tirozil-L-szeril-L-norleucin-metilészter (H-Tyr-Ser-Nle-OMe). 15 54 -g H-Ser-Nle-OMe-HCl-ot és 63 g CBO-Tyr-OH-t feloldunk 880 ml acetonitrilben, 0°ra hűtjük, 28 ml trietilamint adunk hozzá, lehűtjük —10°-ra, és 41 g diciklohexilkarbodi-20 imidet adunk hozzá. A reakciókeveréket 16 óra hosszat 0°-on keverjük, majd szűrőre visszük. A csapadékot 1400 nil piridinnel mossuk. Az egyesített szűredékeket bepároljuk, és a maradványt etilacetátból kikristályosítjuk. 101 g CBO-25 -Tyr-Ser-Nle-OMe-t kapunk 140—142° olvadásponttal. [or]20 D ——15° dimetilformamidban. 51 g előbb kapott terméket feloldunk 2 liter n ímetanolos hidrogénklorid oldatban, és 10 « palládium-szén jelenlétében hidrogénezzük. Kb. 30 2 óra elmúltával megszakítjuk a hidrogénfeivételt. Szűrünk, a szűredéket bepároljuk, és a . maradványt metanol és éter 3 : 1 arányú elegyéből kikristályosítjuk. 42 g H-Tyr-Ser-Nle-OMe-HCl-t kapunk 227° olvadásponttal. [a]20 D 35 =—7° dimetilformaimidban. 4. példa: Karbo-terc.butoxi-D-szeril-L-tirozil-L-szeril-L-40 -norleucinhidrazid (CTB^D.-Ser-Tyr-Ser-Nle-NHiNH2 ). 60 g D-szerin-metilészter-hidrokloridot feloldunk 200 ml dimetilformamidban és 54 ml tri-45 etilaminban, 0°^ra hűtjük, és a trietilaminhidrokloridot leszűrjük. A dimatilformarnidot nagyvákuumban elűzzük, és a maradványt 150 ml piridinben oldjuk. 100 g terc.butiloxikarbonilazidot csepegtetünk hozzá, és 2 napig 20°-on 50 állni hagyjuk. Az oldószert elpárologtatjuk, és a terméket etilacetátfban felvesszük. Vízzel, híg sósavval és káliumhi drogénkarbonát oldattal való mosás után vízmentes nátriumszulfát fölött megszárít-55 juk. Az etilacetát elpárologtatása után CTB-D-Ser-OMe marad vissza olaj alakjában. Az észtert 500 ml metanolban oldjuk, és 50 ml hidrazinhidráttal 2 napig 20°-on állni hagyjuk. A metanol elpárolgása után a hidrazid kikristá-60 lyosodik. Forró etilacetátból átkristályosítva 53 g CTB-iD-S©r-^NHNH2 -t különíthetünk el 114° olvadásponttal. [«]21 D =—3° dimetilformaimidban. 10 g CTB-D-szerinhidrazidot —10°-on felol'dunk 15 g nátriumkloridot tartalmazó 136 ml 65 n sósavban. Ezen a hőmérsékleten 160 ml etil-6
