154711. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a házi szárnyas állatok pasteurellozisa elleni vakcina előállítására
154711 lyai igen eredményesen kiküszöbölhetők, ha az önmagáiban ismert módon inaktivált Pasteurella-tenyészetből készített vakcinával történő kezelést egy, a vakcina hatását lerontó említett megbetegedések és kóros állapotok eredményes 5 leküzdésére alkalmas gyógyszer megfelelő menynyiségével kombináltan alkalmazzuk. Bár az állatok ellenállóképességét lerontó megbetegedések és kóros állapotok ellen önmagukban hatásos antibiotikumokkal végzett ilyen irányú ki- 10 serietek negatív eredménye arra mutatott, hogy az ilyen kombinált kezelések esetén a gyógyszer a vakcina hatását teljesen le is ronthatja, sikerült egy olyan szulfonamid-típusú kemoterápiás szert alkalmaznunk, amely megfelelő mennyi- 15 ségi arányokban alkalmazva egyrészt megvédi az állatokat az említett káros tényezőknek az ellenállóképességet lerontó és az aktív immunizálódást gátló hatásától, másrészt pedig a vakcinával jól kombinálható, nem rontja le a vak- 20 cina hatásosságát, sőt kedvező feltételeket hoz létre az állatok szervezetében a vakcina hatásának érvényesülésére, az aktív immunitás kialakulására. 25 Ilyen a pasteurellozis elleni vakcinával igen előnyös hatással kombinálható kemoterápiás szerként a 2H(p-amino-J benzolszulfonamido)-kinoxalint (sulifachinoxalm) ismertük fel; ez a szer a jelen találmány szerint alkalmazva oly 50 kombinált vakcina előállítását teszi lehetővé, amely a fentemlített hátrányoktól mentes és amely az eddig ismert ilyen célú vakcinákkal ellentétben 'igen hatásos és tartós módon védi a pasteurellozissal való fertőződésnek kitett vagy S5 már fertőzött baromfiállományt a betegség fellépése ellen. A találmány értelmében tehát olyan, subcutan injekció útján alkalmazandó kombinált vak- 40 cina készítményt állítunk elő a házi szárnyas állatok pasteurellozis elleni védelmére, amely az önmagában ismert módon, kíméletesen inaktivált Pasteurella-tenyészetnek az immunizáló hatás elérésére szükséges adagja mellett megfelelő 45 mennyiségű sulfachinoxalint tartalmaz, a készítmény depot^hatását biztosító olajos vivőanyagban. A készítmény említett két (hatásos alkotórészének mennyiségi arányát oly módon szabjuk meg, hogy az ml-enkint kb. 2,5:—30 mii- 50 liárd csírát tartalmazó inaktivált Pasteurella multiseptioa tenyészet 1 ml-jére 0,08—0,15 g, előnyösen 0,10 g sulfaohinoxalin jusson. A készítmény előállítása során célszerűen oly módon járunk el, hogy a sulfachinoxalint a depot-ha- 55 tást biztosító olajos vivőanyagban, célszerűen napraforgóolajban, 10—25%, előnyösen 20% koncentrációban eloszlatjuk és az így kapott 20% körüli koncentrációjú olajos sulfachinoxalin-szuszpenziót elegyítjük az inaktivált Pasteu- 60 rella-tenyészettel, az elegyet erélyes mechanikai keveréssel homogenizálva. A Pasteurella-tenyészet fentemlített koncentrációja esetén 1 súlyrész 20% körüli koncentrációjú olajos sulfachinoxalin-szuszpenzió 2 rész Pasteurella-tenyé- «r, szettel való elegyítése útján kapjuk a kívánt mennyiségi arányú összetételt. A Pasteurella-tenyészet elkészítése önmagában ismert módon történhet. Tekintettel arra, hogy a baromfikolera-kórokozók különböző típusúak lehetnek, a legkedvezőbb védőhatást a tapasztalatok szerint akkor érjük el,, ha az immunizáló vakcinában a kórokozóval azonos típusú Pasteurella-törzs van jelen, a vakcina előállítására előnyösen több különböző, a leggyakrabban előforduló típusú Pasteurella-törzs kombinációját alkalmazzuk. Az így előállított és alkalmas módon, előnyösen nátriumetilmerkuritioszaliciláttal (MerUhiolat) inaktivált Pasteurella-tenyészetet azután a kívánt arányban elegyítjük az olajos sulfachinoxalin-szuszpenzióval és mechanikai keveréssel homogenizáljuk az elegyet. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját az alábbi példa szemlélteti: a) Olajos sulfaehinoxalin-szuszpenzió előállítása. 20 g 2-(aminobenzo]szulfonamido)-kinoxalint 1000 g napraforgóolajjal (kereskedelmi minőségi napraforgó-étolaj) keverünk, és kanalas keverőkészülékben 30 percig homogenizáljuk. b) Inaktivált Pasteurella-tenyészet előállítása. A Pasteurella-törzs tenyésztésére az alábbi folyékony táptalajt alkalmazzuk: Pepton (Richter) 10 g Normál lóvérsavó 60 ml Emésztett sertésmáj 60 ml Élesztő kivonat 60 iml Cukor 5 g Na2 HP0 4 .2 g Desztillált víz ad 1000 ml A fenti összetételű táptalaj pH-értékét 8,0 és 0,2 közöttire állítjuk be. A vakcina elkészítésére nyolc különböző eredetű Pasteurelle multiseptica törzset (4 csirke-, 2 kacsa-, 1 liba- és 1 pulyka-kórokozót, megfelelő fertőzött állatokról) alkalmazunk. A törzseket 10% normál lóvérsavót tartalmazó ágártáptalajon tartjuk fenn és vakcina előállítása előtt egereken vezetjük át azokat. A kitenyésztett törzsek telepei közül csak az „iridescens" baktériumtelepeket oltjuk tovább az inokulumtenyészetként szolgáló, 500 ml-es lombikban elhelyezett folyékony táptalajokba. A tenyészeteket 8 óra hosszat inkubáljuk 37 C° hőmérsékleten, rázóasztalon. A tenyészetek tisztaságának ellenőrzése után az idegen csíráktól mentes tenyészeteket használjuk fel a termelő fermentorok beoltására. • A vakcina előállítása céljából a baktériumokat süllyesztett kultúrában szaporítjuk el. Egy 180 l^es fermentorban 150 1 fenti összetételű folyékony táptalajt viszünk be és azt sterilizálás után beoltjuk a fent leírt módon kapott nyolc különböző inokulum-kultúrával, összesen a termelő táptalaj kb. 3%-ának megfelelő mennyiségű inokulumot alkalmazva. A tenyésztést 32 C° hőmérsékleten, állandó keverés és levegőzte-2
