154337. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidek tisztítással egybekötött betöményítésére

154337 6 datban levő szulfoszalicilsav-nyomok eltávolítása céljából az oldathoz 2 g Amberlite IRA 410 anioncserélő műgyantát keverünk, amelyet az oldat semlegessé válása után szűréssel távolítunk el. Az ,így kapott oldat 28 TIE- és 7 600 000 KIE-aktivitást tartalmaz 13 TIE/g polipeptid tisztaságban. 2. példa: Marhapankreászból készült, tisztított és fehérjementesített, kallikrein-irihibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidek 80 ml vizes oldatához, amely 8 TIE- és 2 200 000 KIE-aktivitást tartalmaz 3,2 g TIE/g polipeptid tisztaságban, 20 ml 96%-os etanolt és 14 ml 50 s/t°/crOs szulfoszalicilsav^oldatot adunk. Az oldatot —8 C°-ra hűtjük és 1 órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd hűtött centrifugában —3 C°-on centrifugálva eltávolítjuk az aktív polipeptideket tartalmazó kivált csapadékot. A csapadékot 20 ml vízben oldjuk, és dietilaminoetil-cellulóz anioncserélővel eltávolítjuk belőle a szulfoszalicilsav-nyomokat. Az így kapott oldat 7,1 TIE- és 1950 000 KIE-aktivitást tartalmaz 11 TIE/g polipeptid tisztaságban. 3. példa: Marhatüdőből készült, tisztított és triklórecetsavval előzőleg fehérjementesített, kallikrein-irihibitor és tripszin-irihibitor tartalmú 100 ml vizes oldathoz, amely 0,05 .TIE/ml és 16 600 KIE/ml aktivitást tartalmaz 3,1 TIE/g polipeptid tisztaságban, 25 ml 20 s/t%-os szulfoszalicilsav-oldatot és 15 ml metanolt adunk, majd —4 C°-ra lehűtjük. 2 óra állás után —4 C°-on centrifugálással elkülönítjük a polipeptid-tartalmú csapadékot, amelyet ezután 50 ml vízben oldunk, és Amberlite IRA 410 anioncserélő műgyanta bekeverésével eltávolítjuk belőle a szulfoszalicilsav-nyomokat. Az így kapott oldat 0,09 TIE/ml és 29 500 KIE/ml aktivitást tartalmaz 10 TIE/g polipeptid tisztaságban. 5 4. példa: Marhaparotiszból készült, 100 ml tisztított kallikrein-mhibitor és tripszin-inhibitor tartalmú vizes oldathoz, amely 0,0086 TIE/ml és 2700 KIE/ml aktivitást tartalmaz 4,2 TIE/g fehérje tisztaságban, 10 ml 50%-os szulfoszalicilsav-oldatot adunk. A csapadékos oldatot 2 órán át 20 C°-on állni hagyjuk. A kivált fehérje-szenynyezést centrifugálással eltávolítjuk, a felülúszóhoz 6 ml acetont adunk, —2 C°-ra lehűtjük, és 2 óra állás után —2 C°-on centrifugálással elkülönítjük az aktív polipeptid-tartalmú csapadékot, amelyet ezután 10 ml vízben oldunk, és 0,5 g Amberlite IRA 410 anioncserélő műgyanta segítségével eltávolítjuk a szulfoszalicilsav-nyomokat. Az oldat 0,08 TIE/ml és 25 000 KIE/ml aktivitást tartalmaz 13,5 TIE/g polipeptid tisztaságban. 10 15 20 30 35 40 Szabadalmi igénypont: Eljárás nagy tisztaságú és koncentrációjú kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptid készítmények előállítására tisztított állati szervkivonatokból, azzal jellemezve, hogy a fenti polipeptideket a tisztított állati szervkivonat, fehérjementeisítése után nyert vizes vagy adott esetben legfeljebb 30 t/t% rövidszénláncú alkoholt vagy ketont is tartalmazó vizes oldatból 2—10 s/t% szulfoszalicilsav hozzáadásával, ill. jelenlétében 15 "C0 alatti, célszerűen 0 C° és —10 C° közötti hőmérsékleten kicsapjuk, a csapadékot elkülönítjük, vízben oldjuk, majd az oldatban levő szulfoszalicilsav-nyomokat ismert módon eltávolítjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6806376. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 3