154245. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidrokortizon mikrobiológiai előállításának optimális kivitelezésére

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEIRAS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1966. IV. 20. (GO—984) Közzététel napja: 1967. VII. 22. Megjelent: 1968. V. 15. 154245 Szabadalmi osztály: 30 h 1—8; 12 o 25 Nemzetközi osztály: A 61 k; C 07 c Decimái osztályozás: Feltalálók: Mizsei Antal gyógyszerész és Dr. Szabó Antal vegyészmérnök, Budapest Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás hidrokortizon mikrobiológiai előállításának optimális kivitelezésére A találmány tárgya eljárás a hidrokortizon mikrobiológiai előállításának optimális kivitelezésére. Az irodalomból ismeretes, hogy egyes mikroorganizmusok a szteránváz 11-es C-atomján de- .5 hidrogénezési műveletre képesek. így pl. az Absidia orchidis-szel a pregn-4-én-17a,21diol-3,20-dion-ból (Reichstein-féle S-vegyület) (I) előállítható a megfelelő 11^-hidroxi-származék, a pregn-4-én-ll/?,17a,21-triol-3,2!0-dion (hidro- 10 kortizon) (II). Ezen enzimreakció során a II főterméken kívül a megfelelő 1 la-hidroxi és 11--keto-származékok, a pregn-4-én-ll«, 17« 21-triol-3,20-dion (epi-hidrobortizon) (III) és a pregn-4-én-17a,2il-diol-3,ll,20-trion (kortizon) (IV), 15 mint melléktermékek keletkeznek. A fermentáció előrehaladtával egy meghatározott értékszint elérése után a már keletkezett hidrokortizon további értéktelen termékekké bomlik el. Minthogy a főtermék termelési maximuma 20 az egyes fermentációk során a tenyészet aktivitásától és egyéb, többé-kevésbé ismeretlen tényezőktől függően más-más időpontban érhető el, a gazdaságos termelés szempontjából kívánatos, hogy a hidrokortizon-koncentráció állá- 25 sáról a fermentációs folyamat alatt lehetőleg minél sűrűbb időközökben tájékozódni lehessen. Erre a célra azok a módszerek, amelyek a hidrokortizon előzetes elválasztását teszik szükségessé, mint pl. az oszlop-, papír- vagy réteg- JQ kromatográfiás eljárások, hosszadalmasságuk, vagy nem kielégítő mennyiségi értékelhetőségük miatt nem alkalmasak. Találmányunk egy specifikus színreakcióképzésre épül, amellyel a hidrokortizon (II) jellegzetesen megkülönböztethető a szerkezetileg hozzá igen közel álló szubsztrátumtól (I) és a párhuzamos reakció során keletkezett vegyületektől (III, IV), valamint egyéb — a fermentléből származó — idegen anyagoktól. Kísérleteink során arra a meglepő eredményre jutottunk, hogy ha a fenti vegyületeket zárt csőben koncentrált sósavval melegítjük, a hidrokortizonnal (II) elérik sárga színű termék jön létre, míg a többi vegyület (I, III, IV) ezt a színt nem adja. A találmány eljárás pregn-4-én-17a,21-diol-3,20-dionból mikrobiológiai úton történő hidrokortizon előállítás optimális kivitelezésére, mely abban áll, hogy a fermentléből időközönként vett mintákat szerves oldószerrel extraháljuk, az extraktumok bepárlási maradékát legalább 20%-os, célszerűen 28—37%-os töménységű vizes sósav-oldattal 15 C° feletti hőmérsékleten kezeljük, a keletkezett sárga színű oldat színintenzitását fotometrikusan mérjük, és a fermentációs folyamatot akkor állítjuk le, amikor a mért színintenzitással arányos hidrokortizon koncentráció-érték lényegileg megegyezik a kiindulási pregn-4-én-17ar,21diol-3,20-dion mennyisége alapján számított értékkel. A fenti feltéte-154245