154228. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus hatású anyagok előállítására
15 154228 16 B—3167) törzzsel szemben jelentős in vitro aktivitást kifejtő anyagot tartalmazó csövekben levő oldatokat egyesítjük és a rétegeket elválasztjuk. Bacillus sp. TA helyett számos más mikroorganizmus, így például Staphylococcus aureus, Sarcina lutea, Bacillus subtilis, Escherichia coli bakteriofág T—5 stb. is felhasználható. A szerves oldószeres réteget 35 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten szárazra pároljuk és a vizes réteget, ugyancsak 35 C° alatti hőmérsékleten, kis térfogatra betöményítjük. A két fázis maradékát egyesítjük, liofilizáljuk. A nyers termék 80—90% tisztaságú. A fentiek szerint előállított 90% tisztaságú anyag tisztított, amorf termékké alakítható oly módon, hogy azt nemalkoholos szerves oldószerben, pl. acetonitrilben, dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban, C3—C7 -ketonokban, mint acetonban, stb. oldjuk, majd valamely alifás szénhidrogén, pl. petroléter, hexán, stb. hozzáadásával frakcionált kicsapást alkalmazunk. A 80—Q0%-os tisztaságú anyag és a tisztított amorf termék a későbbiekben ismertetésre kerülő (I) és (II) képletű vegyületekhez hasonló hatásossággal rendelkezik. >(b). A 45—75% tisztaságú terméket annyi metanolban oldjuk, hogy kb. 2—20%-os oldat keletkezzék. Az oldatot szűrjük, majd a metanol mennyiségére számítva kb. 0,05—0,5; előnyösen mintegy 0,4 térfogatnyi vizet adunk hozzá. Az oldatot ezután .(—8) — (—20) C°-ra hűtjük. A keletkező szuszpenziót szűrjük, a szűrőn levő anyagot kívánt esetben szárítjuk, majd metanolban oldva kb. 1—20%-os, előnyösen mintegy 2%-os oldatot képezünk. Az oldatot szűrjük, majd lassan, hűtés közben [pl. (—8) — (—20) C°on] a metanol 1 tf-nyi mennyiségére vonatkoztatva mintegy 0,01—0,3; előnyösen kb. 0,15 térfogatnyi vizet adunk hozzá. A keletkező kristályokat leszűrjük, kívánt esetben szárítjuk, majd ismét annyi metanolban oldjuk, hogy kb. 1—20%-os, előnyösen mintegy 2%-os oldat képződjék. A nyert oldatot aktív szénnel kezeljük, szűrjük, majd a metanol 1 tf-nyi mennyiségére számítva mintegy 0,01—0,3; előnyösen 0,15 térfogatnyi vizet adunk lassan hozzá. Az ily módon nyert kristályos termék lényegében tiszta vegyület. A fent ismertetett metanolos/vizes átkristályosítást megismételve tiszta, (I) képletű vegyületet kapunk, melynek kémiai elnevezése a következő : 5,10,11,lla-tetrahidro-9-hidroxi-ll-metoxi-8-metil-5-oxo-l H-pirrolo-[2,, 1 -c)[ 1,4]-benzodiazepin-2-abrilamid. A képletben szereplő X jelentése 0—1,5-ig terjedő szám. A fenti lépés kevésbé tiszta, pl. mindössze 20% tisztaságú termékkel is eredményesen elvégezhető. Az (I) képletű vegyületek rákellenes szerek, melyek pl. egéren S 1180 és Ehrlich szilárd tumor ellen hatásosak, továbbá antiprotozoás szerek (pl. Endamoeba histolytica és Trichomonas vag;nalis ellen) és anthelmintikus hatással is rendelkeznek (pl. Syphacia obvelata-val szemben). E vegyületek gyógyászati készítményekben ön-10 15 magukban vagy sóik alakjában nyerhetnek felhasználást. A készítmények a hatóanyagon kívül szerves vagy szervetlen, szilárd vagy folyékony, enterális, pl. orális, perkutáns, vagy parenterálís alkalmazáshoz megfelelő gyógyászati segédanyagokat is tartalmaznak. A gyógyászati készítmények kikészítésénél a hatóanyaggal nem reagáló anyagok, így például víz, zselatin, gumi, laktóz, keményítő, magnéziumsztearát, talkum, növényi olajok, polialkilénglikolok, vazelin, vagy a gyógyászatban használatos, egyéb ismert segédanyagok használhatók fel. A gyógyászati készítmények kikészítése szilárd {pl. tabletta, drazsé, kúp, kapszula), félig-szilárd, (pl. kenőcs) vagy folyékony alakban (pl. oldatok, emulziók vagy szuszpenziók) történhet. A készítmények kívánt esetben sterilizálhatok és/vagy további segédanyagokat, mint például tartósító-, stabilizáló-, nedvesítő- vagy emul-20 geáló-szereket, az ozmózisnyomás változtatására szolgáló sókat vagy puffereket is tartalmazhatnak. A készítményekhez egyéb, gyógyászatilag önmagukban is hatásos komponensek is adhatók. 25 Az (I) képletű vegyületek orálisan vagy injekció formájában, például vizes intravénás oldat, mint pl. 0,01%^os vizes oldat lassú intravénás beadása útján adagolhatok. Az intravénás dózis általában kb. 0,01—0,05 mg/kg állat testsúly. £0 A dozirozást a faji és egyéni követelményeknek megfelelően kell megállapítani. Az orális dózis általában 0,2—2,0 mg/kg állat testsúly. Eljárásunk további részleteit a példákban tüntetjük fel. A példákban szereplő (pl. a fermentlé aktivitására vonatkozó) „egység/ml" defínició a következőképpen értendő: 20 egység/ml-nek választottuk önkényesen annak a vizes oldatnak az aktivitását, amely Staphylococcus aureus va«y Bacillus sp. TA teszt-organizmus esetén, az ismert lyuggatott-lemezes agar diffúziós vizsgálat szerint 1'8—22 mm átmérőjű gátolt növekedésű zónát képez. c5 40 45 1. példa: Néhány kacsnyi Streptomyoes sp. NRRL spórát érett (2—3 napos), 45 C°-os, ferde tenyészetről 100 ml, az alábbi összetételű 50 csíráztató táptalajra viszünk át: Állati vagy növényi fehérjék enzimatikus hidrolizátuma 5 Autolizált élesztő vízoldható frakciója 2 55 Szójábabliszt enzimatikus hidrolizátuma 2 Oldható keményítő 10 Mannit 5 Magnéziumszulfát-7 H2 0 200 60 Ferroammóniumszulfát • 6 H2 0 10 Cinkklorid 2,1 Manganoklorid • 4 Ha O 1,8 Rézszulfát-5 H2 0 0,3 Kobaltnitrát-6 H2 0 0,5 65 Bórsav 0,6 3143 agar •(g/1) g/l g/l g/l g/l g/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/1 mg/l 8
