154228. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus hatású anyagok előállítására
154228 21 Sterilezés előtt valamennyi fermentorban levő táptalaj pH-ját 7,0-re állítjuk be. A fermentorokban levő táptalajt 120 C°-on 1 órán keresztül sterilezzük, majd 48 C°-ra hűtjük és a 2. és 3. fermentort az NRRL 3143 törzs 18,5 órás, az 1. példában ismertetett táptalajon, az ott leírt módszer szerint kifejlesztett tenyészetével beoltjuk. A fermentorokban beoltás után 0,849 m3 /perc (3 köbláb/perc) mértékű levegőztetést és 400 fordulat/perc tengelysebességű keverést alkalmazunk és a hőmérsékletet 48 C°-on tartjuk. 10 22 • A beoltástól számított 12. órában a 2. fermentor pH-ját 6,8-ra állítjuk és időnkénti savvagy lúgadagolással 6,7—6,9 közötti értéken tartjuk. A 3. f er mentor pH-ját ugyancsak a 12. órában 7,2-re állítjuk és a fermentáció folyamán szükség szerint megfelelő mennyiségű sav vagy lúg hozzáadásával 7,2 és 7,4 közötti értéken tartjuk. Az 1. fermentor pH-ját nem szabályozzuk. Az alábbi táblázat adataiból látható, hogy a pH szabályozása mind a fermentáció folyamán, mind pedig azután igen fontos. A fermentlé pH szabályozásának hatása a termelt antibiotikum mennyiségére és stabilizálására Fermentlé aktivitása (TA) egység/ml-ben Fermentor száma, Kezelés Fermentáció kora órákban 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 1. pH beállítás nélkül 370 580 780 1100 1000 730 700 630 400 Fermentlé pH-ja 69 3 6,9 6,9 6,8 68 7,1 7,1 7,0 7,3 2. a 12. órától pH beállítva 6,7—6,9 értékre 0 290 700 1400 2600 3000 3000 2900 3000 2900 3200 2900 2700 Fermentlé pH-ja 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 68 6,8 6,9 6,7 6,7 6,7 6,7 6,9 3. A 12. órától pH 7,2-értékre beállítva -7,4 0 150 420 910 1400 4200 4600 4300 >3000 2700 1800 1600 1600 Fermentlé pH-ja 7,2 7,2 7,2 7,2 7,2 7,2 7,2 7,3 7,3 7,2 7,2 7 3 7,4 5. példa: Az 1. példában leírt eljárás szerint előállított termékből 7 g-ot 350 ml 1 : 1 kloroform-izopropanol elegyben oldunk, melyet előzőleg vízzel 45 egyensúlyba hoztunk. Az oldatot 0,5 ml/perc sebességgel 2,54 cm (1 inch) átmérőjű és 6,1 m (20 láb) magas extrakciós oszlop közepén betápláljuk. Az oszlop aljára egyidejűleg 60 ml/ perc sebességgel egyensúlyba hozott vizes rété- 50 get, és az oszlop tetejére 14,6 ml/perc sebességgel egyensúlyba hozott oldószeres réteget vezetünk. A termék nagyrészét az oszlop tetején távozó vizes réteg tartalmazza. A vizes réteget 2,54 cm (1 inch) átmérőjű, 3,05 m (10 láb) magas 55 extrakciós oszlopon ellenáramban, 1 :1 arányú izopropanol-klorof orm oldószer-eleggyel extraháljuk. Az oldószer-víz arány 1:1. A termék az oszlop alján távozó izopropanol-klorof orm rétegbe megy át. Az oldatot 58 ml-re betörné- 60 nyitjuk, szűrjük, majd a terméket 2,9 1 technikai hexánnal kicsapjuk, szűrjük és szárítjuk. A szárított termék 90% tisztaságú; acetonos kristályosítás után magas aktivitású, tisztított anyagot nyerünk. 65 6. példa: Az 1. példa szerint előállított termékből 20 g-ot izopropanol-kloroform-víz (1:1:2) oldószer-rendszer 120 ml mennyiségű, felső és alsó rétegei között megosztunk. A rétegeket 200 csöves ellenáramú extrakciós berendezés első 3 csövébe töltjük és a készüléken szobahőmérsékleten 197 átvitellel átengedjük. A 45—75 csövek alsó és felső rétegeit egyesítjük, a szerves fázist vákuumban, 35 C° alatti hőmérsékleten bepároljuk, a maradékot a megfelelő vizes fázishoz adjuk s a vizes réteget liofilizáljuk. A liofilizált maradékot acetonból kristályosítjuk és ily módon tisztított terméket kapunk. 7. példa: Az 1. példa szerint előállított termékből 200 g-ot 4000 ml metanolban oldunk és az oldatot szűrjük. A szűrletet keverjük és 1 óra alatt 332 ml vizet adunk hozzá. A hőmérsékletet az adagolás alatt 22; C°-an tartjuk. Az oldatot 1 óra alatt 0 C°-ra hűtjük, majd (—9) C°-os hűtött fürdőben tartva egy éjjelen át keverjük. 11
