154186. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunokémiai reagensek előállítására
154186 és az antigén, ill. antitest természetétől függően választandó meg, az adott esetben optimális eredmények biztosítása érdekében. A találmány szerinti eljárás különböző pH-értékeken és különféle puffer-rendszerek alkalmazásával folytatható le. Végül azt is tapasztaltuk, hogy az előállított immunokémiai reagens stabilitása és az agglutinációs reakció minősége számottevő mértékben javítható, ha az előérzékenyítesi és/vagy az érzékenyítési műveletet magasabb, előnyösen 50 C° és 60 CQ közötti hőmérsékleten folytatjuk le. 1 óra és 20 óra közötti reakció-idők rendszerint elegendőek az említett műveletek lefolytatására. Ugyanilyen hatást érhetünk el, ha a hordozó-részecskéket az előérzékenyítesi és/vagy az érzékenyítési művelet szobahőfokon történő lefolytatása után magasabb, legfeljebb 100 C°-ig menő hőmérsékleten inkubáltatjuk. Ez az inkubáltatás tapasztalataink szerint 1 óra és 20 óra közötti ideig folytatandó, az alkalmazott hőmérséklettől függően, ily módon az érzékenyítés utáni inkubáció igen kedvező hatású. Különösen olyan esetekben érünk el kiváló eredményt, ha a részecskéket az érzékenyítés után 1 óra hosszat inkubáltatjuk 120 C° hőmérsékleten. A találmány szerinti eljárás bármilyen más szilárd hordozóanyag, pl. bentonit-részecskék, kvarcrészecskék, eritrociták, koleszterin-kristályok, ioncserélő gyanták (pl. Dowex 2—X8 vagy Amberlite CG—400), oldhatatlan szerves pigmentek vagy kollódium-részecskék alkalmazása esetén is jól alkalmazhatók. Ha előkezelés nélküli hordozóanyagokat alkalmazunk az immunokémiai reagens előállítására, akkor az adszorbeált antigén, ill. antitestek szerkezeti változásokat szenvedhetnek, pl. igen erősen aktív pontoknak az adszorbeáló felületen való jelenléte következtében (adszorpciós denaturálódás). Az ilyen szerkezeti változások káros hatássál vannak az antigének agglutinációjára és így könnyen belátható, hogy a találmány szerinti előérzékenyítesi művelet, amelynek során az inert fehérje kötődik meg az említett igen erősen aktív adszorbens-felületi pontokon, az ilyen hordozóanyagok esetében is igen előnyös hatást biztosít. Emellett az is feltételezhető, hogy az egyes hordozó-részecskék felületén mélyebb pólusok vannak jelen, amelyekben az adszorbeálódó antigén már nem képes agglutinációt előidéző reakcióba lépni az antitestekkel. Ebben az esetben is előnyös a találmány szerinti előérzékenyítő kezelés, minthogy ilyenkor az inert fehérje ezeket a mély pórusokat is kitölti. Igen jó eredményeket értünk el a találmány szerinti eljárással előállított immunokémiai reagensekkel pl. a humán chorion gonadotrop hormonnak a terhes nők vizeletében történő meghatározása során. Ha pl. bovin szérum-albumint alkalmazunk inert proteinként az előérzékenyítesi műveletben és polisztirol-látexet hordozóként, akkor igen érzékeny és igen specifikus reagenst kapunk. A találmány szerinti eljárást előnyösen alkalmazhatjuk azonban más antigének, ill. a mégfelelő antitestek agglutinációján, ill. az agglutináció inhibitálásán alapuló immunokémiai meghatározásokra is. Az ilyen 5 meghatározási módszerek példáiként az emberi vagy állati eredetű növekedési hormon, folliculus érlelő hormon, szérum-fehérjék, mint gamma-globulin (rheuma-faktor meghatározására), valamint bakteriális eredetű antigének, pl. 10 Treponema reiteri és T. pallidum antigének meghatározását említhettük. A találmány szerinti előérzékenyítő kezelés során kapott hordozórészecske-szuszpenziókat vagy közvetlenül használhatjuk fel a kívánt 15 immunokémiai meghatározások céljaira, vagy pedig előzetesen por alakba hozhatjuk őket, pl. fagyasztószárítás útján. Az ilyen porokból, amelyek az immunokémiai vizsgálat lefolytatásához szükséges valamennyi alkotórészt tartalmazzák, 20 a szükséges gyógyszerészeti segédanyagok hozzáadásával tablettákat is sajtolhatunk. Ezek a tabletták puffer-oldatokban könnyen ismét szuszpendálhatók és így az immunokémiai reakció lefolytatására alkalmas homogén szuszpenziót 25 kapunk. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. SO 1. példa: 10 ml polisztirol-látex (a Difco Laboratories cég, Detroit, Michigan, USA „Bactolatex 0.81" jelű gyártmánya) részecskéit centrifugálás út-35 ján kiülepítettük, majd 10 ml 0,14 mólos, 8,3 pH-értékű borát-pufferoldatban, amely ml-enként 2 mg bovin szérumalbumint tartalmazott feloldva, ismét szuszpendáltuk a részecskéket. Az így kapott szuszpenziót 90 percig inkubáltat-40 tuk 20 C° hőmérsékleten, majd ismét centrifugáltuk. Ezután a látex-részecskéket a fenti puffer-oldat 20 ml-jével egyszer mossuk, majd ismét szuszpendáljuk 10 ml ilyen pufferoldatban, amelyhez 100 NE/ml chorion gonadotrop 45 hormont adtunk. Az elegyet 90 percig inkubáltatjuk 20 C° hőmérsékleten, majd ismét kicentrifugáljuk a részecskéket és a fent említett pufferoldat 20—20 ml-jével kétszer mossuk. Az ily módon előérzékenyített és érzéke-50 nyített látexet 6,7 ml 0,07 mólos, 8,3 pH-értékű borát-pufferoldatban, amelyhez 4% szacharózt és 0,01% mertiolátot is adtunk, szuszpendáljuk. Az így érzékenyített részecskék a chorion gonadotrop hormon elleni antiszérummal agglutinál-^-55 hatók. Az alábbiakban néhány módszert ismertetünk az agglutinációs és agglutináció-inhibitálási reakciók lefolytatására. 60 a) 2 csepp fiziológiás sóoldatot, 1 csepp chorion gonadotrop hormon elleni antiszérumot, amely 0,15 mólos, 7,8 pH-értékű és 3% bovin szérumalbumint is tartalmazó imidazol-pufferoldattal a kívánt hatás-erősségre volt hígítva, 65 valamint 1: csepp fenti módon előkészített látex-3
