154056. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és készítmény transzamináz-aktivitás meghatározására
154056 A transizamánáz^fctivilásnak a látható hullámhosszú fléiny tartományban optikai segédesz^ közlök segítségével való kimutatási lehetősége folytén ez a módszer alkalmazás szempontjaiból, főként a gyógyászatiban', erősen kiterjeszthető. A vizsgálati raódsaer egyszerű eszközei folytán helyi járványszűrővizsgálatakMál és az 'ambuláns, ill. állandó orvosi diagnosztikában jól felhasználható. A vizsgálat egyszerű és gyors kivitelezhetősége folytán lehetővé válik az is, hogy nem képzett munkarők is a transaaminiáz-aktivitás mérését elvégezzék. A transzamináz aktivitás meghatározása fointos szerepeit játszik a hepatitis és miás súlyos betegségek diagnosztikájában. Sok (betegség ambuláns ellenőrző vizsgálata során és kisebb laboratóriumokban is a fenti vizsgálat az orvosi bajmegáHtapítás értékes segédeszköze lehet. Az alábbi kiviteli példák kapcsán mind a trainszaminázaktivitás meghatározását, mind a készítmény összetételét és alkalmazását közelebbről szemléltetjük. 1. példa Az alábbi összetételű készítmény a GOT-meghatározására alkalmas: 1. oldat: 10 15 20 25 2. példa Az; alábbi összetételű készítmény a GPT meghatározására alkalmas: 1. oldat: 0,2 mólos-, 8 pH-értékű trietanolaminos puffer 3,6-3 mg% dMórfenolindofenol p. a. 9xl(T4 mólos NAD 1,8 x 10-2 mólos aüiainin 2, oldat1 : 0,2 mólos, 8 pH-értékű trietanolaminos puffer 2,55 mg% diklórfenolindofenol p. a. 9xl0~4 mólos NAD 1,8 x 10~2 mólos alanin A 3., 4, ési 5. oldatok az (1. példa szerinti ös&szetételial rendelkeznek. Az okiatok eltarthatóságát és tárolási rStételeit is az 1. példa ismerteti. 3 .példa Szokásos hordozóanyagot, mint papírt vagy rostanyagot az 1. és 2, pélldla szerinti készítményekkel átitatunk és liofilizáló módszerrel szálltjuk. Az egyik indikátorcsík az 1., 3., 4. és 5. oldattal, míg az összehasonlító indikátorcsík csak a 2. ós 3. oldattal van átitatva. 0,1 mólos, 8 pH-értékű trietanolaminos puffer 3,05 mg% diklórfenolindofenol p. a. 9 x 10-* NAD 1,8 x 10-2 mólos aszpartát 4. példa 35 A vizsgálat elvégzéséhez az 1., 2. példa szerinti oldatokat az alábbi táblázatból kivehető arányban összekeverjük. 2. oldat: 0,1 mólos, 8 pH-értékű trietanolaminos puffer 2,15 mg% diMórfemolindofenol p. a. 9x10-4 NÁD 1,8 x liO 2 mólos aszpartát 3. oldiat: 0!,!% fenazinimetoszultfát 4. oldat: 10 mg/ml 50%-os glicerinnel stabilizált glutamátdehidrogenáz 5. oldat: 0,2 mólos alfa-ketoglutarát. A 3., 4. és 5. oldatok 0'—5 C°-on külön-külön, sötét helyen, több napon keresztül tárolhatók. Az 1. ás 2.. oldatot a fenti összetételiben 2 napnál hosszabb ideig ne használjuk: fel a méréshez, mivel a relatíve lúgos közeg a piridinnukleotiidot elbontja. NAD nélkül azonban a fenti oldatok ils hűvös helyen, több napig elállnak. Ilyen esetiben a NAD-t később adagoljuk az oldatokihoz. Próbacső A B 1. oldiat 1,64 ml 2. oMat — 1,64 ml 3. oldat 0,04 mi 0,04 ml 4. oldat 0,02 ml — 5. oldat 0,02 ml — A transzamináz meghatározásához használható 40 elegy: 45 50 A vizsgálandó anyagot ezt követően egyidejűleg az A és B próbacsőbe tesszük és az oldatokat fotometriás úton vagy vizuálisan összehasonlít juik. Abból a óéiból, hogy a redukál óanyagofc nem enzimatikus jellegű befolyását a mé-55 rési eredményből kiszűrjük, a vizsgálatokat vakpróbával hasonlítjuk össze. Az enzimaktivitás mértékét úgy határozzuk meg, hogy a vizsgálandó anyag beadagolása és a kélt próbacső, ill. indikátorcsík isziínegyenlő-60 sége között eltelt időt mérjük. A vakpróba és a valódi mérés közötti színkülönbség megválasztása útján egy meghatározott tartományban a traniszamiinázHaktivitás kimutatásához használt módszer pontossága annyira megnövelhető, 65 hogy kétszer olyan érzékennyé tehető (hiba ± 2
